版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:本研究的目的是以microRNA(miRNA)作為視角,對(duì)宮頸癌相關(guān)病毒——人乳頭瘤病毒(HPV)引起腫瘤細(xì)胞抵抗化療藥物的作用機(jī)制進(jìn)行研究。
方法:
?。?)MTT法檢測(cè)不同濃度多西他賽對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(-)-E7和pcDNA3.1(-)基因的PC3細(xì)胞抑制率;
?。?)RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)變化;
?。?)RT-PCR檢測(cè)擬定miRNA表達(dá)情況;
?。?)計(jì)算
2、機(jī)分析軟件預(yù)測(cè)擬定miRNA的潛在靶基因;
?。?) Western blot檢測(cè)miRNA潛在靶基因的蛋白表達(dá)水平變化;
?。?)重組熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒pGL3-CM/miRNA-17-CDK6的構(gòu)建及功能分析;
?。?)擬定miRNA的類似物/抑制劑(Mimics/Inhibitors)與重組報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的功能分析。
結(jié)果:
(1) MTT結(jié)果提示多西他賽對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染E7的PC3細(xì)
3、胞的抑制率較之對(duì)轉(zhuǎn)染空載的PC3細(xì)胞的抑制率明顯降低;
(2) RT-PCR檢測(cè)擬定miRNA表達(dá)情況發(fā)現(xiàn),在轉(zhuǎn)染E7后miRNA-17的表達(dá)降低,轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的細(xì)胞加藥后miRNA-17表達(dá)顯著增加,轉(zhuǎn)染E7的細(xì)胞加藥前后miRNA-17表達(dá)變化不明顯;
?。?)通過計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)分析軟件發(fā)現(xiàn)CDK6是miRNA-17的一個(gè)潛在靶基因;
?。?)RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)基因——細(xì)胞周期相關(guān)蛋白激酶CDK6表達(dá)
4、變化發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染E后CDK6表達(dá)明顯增高;空載組加藥后CDK6表達(dá)明顯降低;而轉(zhuǎn)讓E7組,加藥后CDK6表達(dá)變化不明顯;
?。?)Western Blot檢測(cè)CDK6蛋白水平表達(dá)變化與基因表達(dá)水平相一致;
?。?)成功構(gòu)建熒光素酶報(bào)告基因,經(jīng)過測(cè)序鑒定結(jié)果正確。將構(gòu)建的熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)染兩組穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞,再加藥處理后,檢測(cè)熒光素酶活性(熒光素酶活性高低與miRNA表達(dá)水平負(fù)相關(guān)),發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染E7后,熒光素酶活性顯著升高;而空載
5、組加藥后熒光素酶活性明顯降低;E7組加藥后,熒光素酶活性又有所降低,但變化沒有前者顯著,說明CDK6是miRNA-17潛在一個(gè)靶基因;
(7)將Mimics/Inhibitors與重組報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)E7組轉(zhuǎn)染mimics較轉(zhuǎn)染N.C熒光活性降低,而空載組轉(zhuǎn)染Inhibitor較轉(zhuǎn)染Inhibitor N.C熒光活性顯著增高,進(jìn)一步說明CDK6是miRNA-17潛在一個(gè)靶基因。
結(jié)論:
?。?)HPV
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- MicroRNA-17~92簇和MicroRNA-221在移植靜脈再狹窄中作用機(jī)制的研究.pdf
- MicroRNA-17抑制角膜上皮損傷修復(fù)的機(jī)制研究.pdf
- microRNA-17抑制人包皮成纖維細(xì)胞衰老的作用及機(jī)制研究.pdf
- HPVE7調(diào)控的RRM2促進(jìn)宮頸癌血管形成的機(jī)制研究.pdf
- FBXW7通過調(diào)控FetuinA蛋白水平改善胰島素抵抗的機(jī)制研究.pdf
- microRNA-363通過下調(diào)S1PR1抑制肝癌細(xì)胞增殖.pdf
- CCR7通過mTOR路徑調(diào)控頭頸鱗癌細(xì)胞順鉑化療作用的研究.pdf
- Calpain2通過ATG7在運(yùn)動(dòng)改善胰島素抵抗中的作用研究.pdf
- MicroRNA-451通過下調(diào)IL6R基因表達(dá)以抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的研究.pdf
- microRNA-17家族逆轉(zhuǎn)非小細(xì)胞肺腺癌順鉑耐藥作用機(jī)制的初步研究.pdf
- MicroRNA-602通過下調(diào)RASSF1A表達(dá)參與HBV感染→肝硬化→肝癌進(jìn)程調(diào)控.pdf
- microRNA--22通過調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化抑制內(nèi)膜新生的作用機(jī)制研究.pdf
- miR-34通過自噬作用調(diào)控衰老的機(jī)制研究.pdf
- miR-506通過SPHK1-Akt-NF-κB信號(hào)通路抑制胰腺癌進(jìn)展和化療抵抗的機(jī)制研究.pdf
- Foxp3通過下調(diào)CD44表達(dá)抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究.pdf
- 雌激素通過上調(diào)microRNA-17~92a并抑制其靶向蛋白Bim抗成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf
- GLP-1通過WNT通路改善肝臟胰島素抵抗機(jī)制探討.pdf
- MicroRNA-7通過Bax和sirt2抑制MPP+誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞模型凋亡機(jī)制研究.pdf
- MicroRNA-581通過EDEM1調(diào)節(jié)HBsAg的表達(dá).pdf
- MicroRNA-145通過下調(diào)Smad3抑制TGF-β介導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論