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1、中南大學碩士學位論文小鼠精原干細胞體外培養(yǎng)體系的初步研究姓名：孫源申請學位級別：碩士專業(yè)：生殖工程指導教師：范立青20080501碩士學位論文中文摘要兩組精原干細胞的體外增殖能力和凋亡率。第三部分：取9～12周齡ICR雄性小鼠無菌切取睪丸，兩步酶消化后經(jīng)Ficoll富集，沿用新生小鼠體外培養(yǎng)體系，培養(yǎng)后通過BrdU整合實驗檢測第5天、第lO天、第15天的增殖情況，并采用AP染色及免疫熒光進行鑒定。結(jié)果小鼠精原干細胞在體外可穩(wěn)定增殖，已傳
2、至第15代，培養(yǎng)所得克隆AP檢測陽性，標記物檢測GFRQ1／Oct4機ASA／SCP3。，基因表達GFRQ1／Oct4／SCP3。，證實所培養(yǎng)細胞為處于未分化狀態(tài)的小鼠精原干細胞。在其他培養(yǎng)條件相同的前提下，培養(yǎng)第2代時添加LIF的組I生殖細胞克隆數(shù)目平均每培養(yǎng)孔為7040806，而組II為平均每孔37604715；培養(yǎng)第5代時組I克隆數(shù)目平均每培養(yǎng)孔為7520783，而組II為平均每孔4460635，組間均存在統(tǒng)計學差異(PO05)。
3、培養(yǎng)第2代時第3天、第5天兩個時間段組IBrdU陽性率分別為4607795％、4509780％，組II為3147334％，3173328％；培養(yǎng)第5代時兩個時間段組IBrdU陽性率分別為66224751％、6240638％，組II為4968732％，4630615％。經(jīng)統(tǒng)計學分析，相同時間段內(nèi)組IBrdU陽性細胞率均顯著高于組II(PO05)。培養(yǎng)第2代時第3天、第5天組I凋亡率分別為10674228％、1106283％：組II細胞凋亡
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