枸杞多糖對(duì)精原干細(xì)胞體外增殖的影響.pdf

1、背景：隨著男性不育的逐年增加，精原干細(xì)胞研究在男性生殖健康領(lǐng)域展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景，采用精原干細(xì)胞移植的方法來(lái)治療非梗阻性無(wú)精子癥具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，尤其給青春期前接受大劑量化療或放療所致不育的患者及其家庭帶來(lái)了希望。建立有效的精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，獲得數(shù)量足夠、純度較高的精原干細(xì)胞是進(jìn)行精原干細(xì)胞有效移植的基礎(chǔ)，精原干細(xì)胞的體外增殖培養(yǎng)仍是精原干細(xì)胞研究中的熱點(diǎn)之一。盡管近些年來(lái)對(duì)精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的研究取得了一些進(jìn)展，但至

2、今仍然未建立一種簡(jiǎn)單有效的體外培養(yǎng)方法。因此，如何建立一種迅速、有效的精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法仍是目前精原干細(xì)胞研究中亟待解決的問(wèn)題之一。
　　目的：探討枸杞多糖對(duì)精原干細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)效果的影響。
　　方法：取出生后4～6 d的雄性 C57 BL/6小鼠，采用機(jī)械分離與兩步酶消化法從睪丸組織中獲取 Sertoli細(xì)胞與精原干細(xì)胞，建立 Sertoli細(xì)胞飼養(yǎng)層，將精原干細(xì)胞接種在 Sertoli細(xì)胞飼養(yǎng)層上體外共培養(yǎng)，并將枸

3、杞多糖（LBP）及細(xì)胞因子按實(shí)驗(yàn)分組要求分別添加到細(xì)胞培養(yǎng)液中。按照培養(yǎng)液不同實(shí)驗(yàn)分為3組，A組：培養(yǎng)液為 DMEM/F12－C，B組：DMEM/F12－C培養(yǎng)液+100 ug/ml LBP， C組：DMEM/F12－C培養(yǎng)液+100 ug/ml LBP+10 ng/ml膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）+1000 U/ml白血病抑制因子（LIF）。細(xì)胞原代培養(yǎng)一周后，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞活性率及細(xì)胞周期，并以 GFRa-1、Thy-

4、1、c-kit作為標(biāo)志物，分別檢測(cè)各組精原干細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率。
　　結(jié)果：通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞活性率，采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行 t檢驗(yàn)和單因素方差分析，A組為（63.42±4.24）％， B組為（87.16±0.88）％，C組為（97.27±1.59）％,各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均 P<0.05)；以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，A組 S期細(xì)胞為（11.61±0.99）％，B組為（16.38±0.78）％， C組為（16.59

5、±0.74）％, A組較B組及C組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，但 B組與 C組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。以 GFRa-1為標(biāo)志物檢測(cè)各組精原干細(xì)胞陽(yáng)性率，A組為（6.43±1.63）％，B組為（11.07±1.31）％，C組為（22.0±0.41）％,各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均 P<0.05)；以 Thy-1為標(biāo)志物檢測(cè)各組精原干細(xì)胞陽(yáng)性率，A組為（29.89±0.53）％，B組為（36.85±0.64）％， C組

6、為（43.42±1.71）％,各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均 P<0.05)；以 c-kit為標(biāo)志物檢測(cè)各組精原干細(xì)胞陽(yáng)性率， A組為（7.97±0.32）％， B組為（9.74±2.23）％，C組為（16.77±1.71）％, C組較 A組及B組明顯高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均 P<0.05)，但 A組與 B組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：將精原干細(xì)胞與 Sertoli細(xì)胞體外共培養(yǎng)，在枸杞多糖或枸杞多糖聯(lián)合膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因