黃芩湯對胃癌干細(xì)胞體外增殖的影響.pdf

1、目的:
　　本課題組從SGC-7901胃癌細(xì)胞中分離并富集了胃癌干細(xì)胞，研究黃芩湯對胃癌干細(xì)胞體外增殖的影響。
　　方法:
　　1、HPLC測定:采用HPLC法測定黃芩湯中9種有效成分的含量。
　　2、胃癌干細(xì)胞培養(yǎng):無血清培養(yǎng)法從胃癌SGC-7901細(xì)胞系中富集/分離出胃癌干細(xì)胞。
　　3、鑒定:從克隆形成、化療耐藥、裸鼠體內(nèi)成瘤等方面鑒定分離出的細(xì)胞是否是干細(xì)胞樣細(xì)胞。
　　4、MTT實(shí)驗(yàn):采用不

2、同濃度的黃芩湯干預(yù)胃癌干細(xì)胞24h后，檢測各孔OD值。
　　5、細(xì)胞凋亡率檢測:采用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組胃癌干細(xì)胞的凋亡率。
　　6、細(xì)胞周期檢測:采用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組胃癌干細(xì)胞的周期分布情況。
　　結(jié)果:
　　1、HPLC測定:黃芩湯中含有芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、甘草苷、刺芒柄花苷、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素和甘草酸等9種主要有效成分，含量和穩(wěn)定性均符合要求。
　　2、胃癌干細(xì)胞培養(yǎng):SGC-7901

3、胃癌細(xì)胞在無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基(EGF，bFGF、B27、N-2)中培養(yǎng)，約4-7天可見細(xì)胞增殖成團(tuán)。1周后，球體明顯增大，所含細(xì)胞數(shù)目顯著增多。每14-15天將所獲細(xì)胞傳代一次，細(xì)胞數(shù)量充足可供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
　　3、鑒定:經(jīng)克隆形成、化療耐藥、裸鼠成瘤能力等實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證，從SGC-7901胃癌細(xì)胞中所獲細(xì)胞具有干細(xì)胞特性，為胃癌干細(xì)胞。
　　4、各組胃癌干細(xì)胞增殖抑制率的變化:黃芩湯濃度在0.5mg/ml-3.0mg/ml

4、內(nèi)，干預(yù)胃癌干細(xì)胞24h后，細(xì)胞增殖抑制率呈劑量、時(shí)間依賴性。
　　5、細(xì)胞凋亡率變化:同空白對照組及陰性對照組相比，各黃芩湯干預(yù)組細(xì)胞凋亡率均顯著升高。
　　6、細(xì)胞周期變化:同空白對照組及陰性對照組相比，各黃芩湯干預(yù)組G0/G1期細(xì)胞比例無顯著性變化，S期細(xì)胞比例下降，G2/M期細(xì)胞比例增加。
　　結(jié)論:
　　1、采用無血清成球培養(yǎng)法從胃癌SGC-7901細(xì)胞系中成功富集/分離出了胃癌干細(xì)胞。
　　2、