版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、過(guò)量紫外線照射是導(dǎo)致皮膚癌發(fā)生的重要原因,其中的發(fā)病機(jī)理一直是生物醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)方向。近年來(lái),對(duì)于UV照射引起的基因可變剪接的研究越來(lái)越得到重視,因?yàn)閁V照射應(yīng)激下表達(dá)的基因變異體對(duì)于腫瘤的形成有重要促進(jìn)作用。其中,mdm2基因作為一種致癌基因,在多種腫瘤中表現(xiàn)出高水平表達(dá),同時(shí),在腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了mdm2基因的多種變異體,這些變異體的出現(xiàn)對(duì)于腫瘤的發(fā)生有重要的促進(jìn)作用。并且,有研究證明UVB照射可以有效誘導(dǎo)mdm2基因的可變剪接過(guò)程,
2、但是具體的調(diào)控機(jī)制仍然不清楚。剪接因子是一類(lèi)調(diào)控基因可變剪接的重要蛋白,它們可以通過(guò)調(diào)節(jié)基因的可變剪接過(guò)程產(chǎn)生不同的基因變異體,從而導(dǎo)致細(xì)胞生理過(guò)程的改變。但是剪接因子是否調(diào)控UVB照射引起的mdm2可變剪接過(guò)程還沒(méi)有研究報(bào)道。本論文以hnRNP A1和ASF/SF2兩個(gè)重要的剪接因子為研究對(duì)象,用細(xì)胞分子生物學(xué)方法檢測(cè)了剪接因子hnRNP A1和ASF/SF2在UVB引起的mdm2基因可變剪接過(guò)程中的調(diào)節(jié)作用。
另外,剪接因
3、子hnRNP A1和ASF/SF2在多種類(lèi)型的腫瘤中都表現(xiàn)出高表達(dá),被認(rèn)為是一種促進(jìn)癌癥的因子,研究?jī)梢蜃訉?duì)于UVB照射的響應(yīng)及細(xì)胞存活影響可以加深對(duì)皮膚癌發(fā)生機(jī)理的認(rèn)識(shí)。其中,我們研究了UVB照射劑量和時(shí)間對(duì)于hnRNP A1和ASF/SF2表達(dá)以及細(xì)胞定位的影響,也研究了在UVB照射下ROS,p53以及NF-κB和Akt信號(hào)通路對(duì)于剪接因子hnRNP A1和ASF/SF2表達(dá)的影響,以全面地了解hnRNP A1和ASF/SF2對(duì)UV
4、B照射的響應(yīng)及其對(duì)腫瘤促進(jìn)的作用。
細(xì)胞自噬是UVB照射引起的細(xì)胞反應(yīng),可以促進(jìn)UVB照射下細(xì)胞的存活,并在腫瘤的發(fā)展過(guò)程中起重要作用。而目前對(duì)于細(xì)胞自噬與剪接因子之間關(guān)系的研究還沒(méi)有報(bào)道,在本論文中,我們?cè)噲D探究HaCaT細(xì)胞中剪接因子與細(xì)胞自噬之間的關(guān)系,以增進(jìn)剪接因子促癌功能的了解。
綜上,本論文主要研究?jī)?nèi)分為三大部分:1.UVB通過(guò)剪接因子hnRNP A1和ASF/SF2調(diào)控mdm2的可變剪接過(guò)程;2.剪接因
5、子hnRNP A1和ASF/SF2對(duì)于UVB照射下的響應(yīng)及細(xì)胞存活的影響;3.hnRNP A1和ASF/SF2與UVB導(dǎo)致的細(xì)胞自噬之間的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:
?、賃VB可以促進(jìn)HaCaT細(xì)胞中mdm2基因的可變剪接,促使mdm2B剪接變異體表達(dá)量增加,mdm2-FL下調(diào)。
?、赨VB照射可以促進(jìn)HaCaT細(xì)胞中hnRNP A1和ASF/SF2的表達(dá),其中剪接因子hnRNP A1通過(guò)與mdm2 pre-mRNA的直接
6、結(jié)合進(jìn)而調(diào)控UVB引起的mdm2選擇剪接過(guò)程,但是在我們的實(shí)驗(yàn)中,ASF/SF2卻對(duì)mdm2的可變剪接過(guò)程沒(méi)有顯著調(diào)控影響。
?、踀VB照射引起的HaCaT細(xì)胞中hnRNP A1和ASF/SF2的高表達(dá)具有時(shí)間依賴(lài)性,通過(guò)免疫熒光和western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)UVB照射后,兩個(gè)蛋白可以從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中。
?、芙?jīng)藥物清理ROS,western blot檢測(cè),證明ROS可以抑制UVB引起的剪接因子hnRNP A1和
7、ASF/SF2的上調(diào);同時(shí),通過(guò)瞬時(shí)過(guò)表達(dá)p53,證明p53也是UVB引起的hnRNP A1和ASF/SF2表達(dá)的負(fù)調(diào)控因子。
?、萃ㄟ^(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入抑制劑,用western blot檢測(cè),證明抑制NF-κB與Akt信號(hào)通路可以導(dǎo)致hnRNP A1和ASF/SF2的下調(diào);但是在加入NF-κB抑制劑后再進(jìn)行UVB照射,仍然可以促進(jìn)hnRNP A1和ASF/SF2水平的上調(diào),而加入Akt信號(hào)通路抑制劑組再進(jìn)行UVB處理后hnRN
8、P A1和ASF/SF2水平不再上調(diào),說(shuō)明UVB主要通過(guò)Akt信號(hào)通路調(diào)控hnRNP A1和ASF/SF2的表達(dá)。
?、抻胹iRNA將hnRNP A1和ASF/SF2水平沉默后檢測(cè)細(xì)胞在UVB照射后細(xì)胞存活率,證明hnRNP A1和ASF/SF2有促進(jìn)UVB照射后HaCaT細(xì)胞存活的功能。
⑦通過(guò)慢病毒構(gòu)建EGFP-LC3B的HaCaT穩(wěn)定細(xì)胞株,構(gòu)建了可以通過(guò)熒光顯微鏡以及western blot方法檢測(cè)的細(xì)胞自噬模
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- HnRNP A1、CYP2A6及肝癌相關(guān)性的體外研究.pdf
- HepG2細(xì)胞中CYP2A6活性與hnRNP A1表達(dá)關(guān)系的研究.pdf
- HnRNP A2-B1在肺癌患者組織和痰中的表達(dá)及欖香烯對(duì)HnRNP A2-B1的影響.pdf
- 發(fā)菜細(xì)胞對(duì)UVB輻射響應(yīng)的代謝機(jī)制研究.pdf
- 擬南芥組蛋白分子伴侶ASF1的功能研究.pdf
- 檉柳乙烯響應(yīng)因子ThERF1的克隆和功能分析.pdf
- 上游刺激因子2(USF2)對(duì)Smurf1和Smurf2的功能調(diào)控研究.pdf
- 端粒結(jié)合因子1對(duì)p53和ATM的功能調(diào)控及其機(jī)理研究.pdf
- 穗期高溫響應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子OsHRT2功能研究.pdf
- 草莓果實(shí)對(duì)MeJA和1-MCP的響應(yīng)及其機(jī)理研究.pdf
- 花生干旱脅迫響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子AREB1基因等位變異和功能研究.pdf
- 組織因子途徑抑制物-2及其結(jié)構(gòu)域1的基因克隆、表達(dá)和功能研究.pdf
- 選擇性剪接對(duì)基因功能和蛋白結(jié)構(gòu)影響的研究.pdf
- 40400.3種海洋橈足類(lèi)對(duì)uvb輻射增強(qiáng)的響應(yīng)研究
- 51513.幾種海洋赤潮藻對(duì)uvb輻射增強(qiáng)的響應(yīng)
- 玉米苗期干旱脅迫下可變剪接及其調(diào)控因子的研究.pdf
- 轉(zhuǎn)錄因子Poxp1對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞分化和功能的調(diào)控作用及其機(jī)制研究.pdf
- 趨化因子CCL2對(duì)血小板功能的調(diào)控及其機(jī)制研究.pdf
- Fyn通過(guò)hnRNP E1調(diào)節(jié)integrin β1選擇性剪接調(diào)控胰腺癌轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究.pdf
- 幾種園林樹(shù)木光合特性及其對(duì)環(huán)境因子的響應(yīng)研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論