PILP通過與HOPs復合體VPS41亞基相互作用調控胞吞途徑.pdf

1、HOPs復合體包含VPS11/VPS16/VPS18/VPS33/VPS39/VPS41六種蛋白。HOPs復合體在細胞的內膜系統(tǒng)的統(tǒng)一性與自動化方面發(fā)揮合理調節(jié)的職能,蛋白質的膜泡運輸普遍存在于整個細胞生命活動中,具有重要的生物學意義。
　　 雖然人類基因組中編碼HOPs各個亞基的基因已經(jīng)被克隆鑒定,但是有關其功能的鑒定還很少,并且HOPs復合體在哺乳動物的生物活性功能調控機制的研究還是空白。HOPs復合體作為Rab7的粘附因子

2、或GEF(鳥苷轉移因子)來調節(jié)早期內體到晚期內體的轉變以及晚期內體膜的成熟。以上調節(jié)機制在酵母細胞中研究的較為全面,但是對于在哺乳動物細胞中相關調節(jié)機制的了解還是很局限的。
　　 通過免疫熒光、GST-pulldown等實驗,對HOPs復合體在哺乳動物細胞中的相互作用蛋白進行了較為系統(tǒng)的探索,研究的主要結果如下:
　　 免疫熒光實驗表明,HOPs復合體的六個亞基和Rab7在細胞內沒有共定位,但同時過表達RILP(Rab7

3、的下游效應因子)和HOPs復合體,發(fā)現(xiàn)RILP和HOPs復合體的各個亞基(除VPS33)有明顯的共定位,而且RILP能將HOPs復合體的各個亞基(除VPS33)募集到晚期內體的囊泡膜上。同時,通過GST-pulldown實驗表明,RILP與HOPs復合體(除VPS33)存在相互作用。隨后通過一系列的免疫熒光實驗和GST-pulldown實驗表明,發(fā)現(xiàn)RILP的氨基端與HOPs復合體相互作用,即不依賴于Rab7的作用。其中,VPS41亞基

4、是通過其羧基端與RILP直接相互作用的蛋白,在RILP-HOPs復合體的相互作用中發(fā)揮關鍵作用。通過EGFR內吞實驗,發(fā)現(xiàn)當使用RNAi干擾技術將VPS41干擾后,EGFR的降解過程明顯受到抑制,說明HOPs復合體在EGFR介導的內吞途徑中發(fā)揮重要作用,在此過程中可能還會受到Rab7和RILP的影響。
　　 本研究結論有助于進一步豐富HOPs復合體在哺乳動物中的細胞內膜泡運輸途徑及其調控機制,為內吞途徑的研究提供了新的理論依據(jù),