PILP通過與HOPs復(fù)合體VPS41亞基相互作用調(diào)控胞吞途徑.pdf

1、HOPs復(fù)合體包含VPS11/VPS16/VPS18/VPS33/VPS39/VPS41六種蛋白。HOPs復(fù)合體在細(xì)胞的內(nèi)膜系統(tǒng)的統(tǒng)一性與自動化方面發(fā)揮合理調(diào)節(jié)的職能,蛋白質(zhì)的膜泡運輸普遍存在于整個細(xì)胞生命活動中,具有重要的生物學(xué)意義。
　　 雖然人類基因組中編碼HOPs各個亞基的基因已經(jīng)被克隆鑒定,但是有關(guān)其功能的鑒定還很少,并且HOPs復(fù)合體在哺乳動物的生物活性功能調(diào)控機制的研究還是空白。HOPs復(fù)合體作為Rab7的粘附因子

2、或GEF(鳥苷轉(zhuǎn)移因子)來調(diào)節(jié)早期內(nèi)體到晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變以及晚期內(nèi)體膜的成熟。以上調(diào)節(jié)機制在酵母細(xì)胞中研究的較為全面,但是對于在哺乳動物細(xì)胞中相關(guān)調(diào)節(jié)機制的了解還是很局限的。
　　 通過免疫熒光、GST-pulldown等實驗,對HOPs復(fù)合體在哺乳動物細(xì)胞中的相互作用蛋白進行了較為系統(tǒng)的探索,研究的主要結(jié)果如下:
　　 免疫熒光實驗表明,HOPs復(fù)合體的六個亞基和Rab7在細(xì)胞內(nèi)沒有共定位,但同時過表達RILP(Rab7

3、的下游效應(yīng)因子)和HOPs復(fù)合體,發(fā)現(xiàn)RILP和HOPs復(fù)合體的各個亞基(除VPS33)有明顯的共定位,而且RILP能將HOPs復(fù)合體的各個亞基(除VPS33)募集到晚期內(nèi)體的囊泡膜上。同時,通過GST-pulldown實驗表明,RILP與HOPs復(fù)合體(除VPS33)存在相互作用。隨后通過一系列的免疫熒光實驗和GST-pulldown實驗表明,發(fā)現(xiàn)RILP的氨基端與HOPs復(fù)合體相互作用,即不依賴于Rab7的作用。其中,VPS41亞基

4、是通過其羧基端與RILP直接相互作用的蛋白,在RILP-HOPs復(fù)合體的相互作用中發(fā)揮關(guān)鍵作用。通過EGFR內(nèi)吞實驗,發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用RNAi干擾技術(shù)將VPS41干擾后,EGFR的降解過程明顯受到抑制,說明HOPs復(fù)合體在EGFR介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑中發(fā)揮重要作用,在此過程中可能還會受到Rab7和RILP的影響。
　　 本研究結(jié)論有助于進一步豐富HOPs復(fù)合體在哺乳動物中的細(xì)胞內(nèi)膜泡運輸途徑及其調(diào)控機制,為內(nèi)吞途徑的研究提供了新的理論依據(jù),