載淋球菌PorB基因殼聚糖納米粒的制備及其誘導小鼠的免疫應答.pdf

1、目的:以殼聚糖為基質材料,制備淋球菌porB基因緩釋微球,通過鼻黏膜途徑及肌注途徑免疫BALB/c小鼠,分析其免疫活性,探討其能否增強特異性體液免疫和細胞免疫應答水平,為殼聚糖納米粒作為淋球菌DNA疫苗載體的應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:采用復凝聚法制備CS-pcDNA3.1(-)/porB微球,分別用透射電鏡,激光粒度分析儀觀察微球形態(tài)、大小、zeta電位;核酸酶研究其保護性; DNA電泳阻滯分析CS-pcDNA3.1(-)/p

2、orB納米粒結合能力;釋放實驗評價CS-pcDNA3.1(-)/porB的穩(wěn)定性;用MTT法評價CS-pcDNA3.1(-)/porB的細胞毒性高低。將殼聚糖-pcDNA3.1(-)/porB納米粒和裸質粒pcDNA3.1(-)/porB納米粒通過鼻飼和肌注途徑免疫雌性BALB/c小鼠,ELISA法測定小鼠體液免疫和細胞免疫應答水平。
　　結果:
　　(1)殼聚糖與 pcDNA3.1(-)/porB質粒形成穩(wěn)定的微球,包封率

3、大于90％,多數(shù)成球形,直徑在100-300nm之間。
　　(2)殼聚糖納米粒能有效抵抗核酸酶的降解作用,4℃保存45d,殼聚糖納米粒仍能較穩(wěn)定地和porB質粒結合。MTT毒性試驗證明殼聚糖-pcDNA3.1(-)/porB納米粒在高劑量才出現(xiàn)低細胞毒性。
　　(3) CS-pcDNA3.1(-)/porB與裸質粒 pcDNA3.1(-)/porB組通過鼻黏膜免疫及肌肉注射免疫均能誘導小鼠產(chǎn)生有效的免疫應答。CS-pcDNA

4、3.1(-)/porB誘導的血清特異性IgG和生殖道灌洗液特異性sIgA抗體水平隨免疫時間呈上升趨勢,與裸質粒pcDNA3.1(-)/porB組相比差異顯著(P<0.05),同時CS-pcDNA3.1(-)/porB鼻飼和肌注免疫組小鼠脾淋巴細胞經(jīng)特異性抗原刺激后,脾淋巴細胞誘生的IFN-γ和IL-4含量明顯升高,與裸質粒pcDNA3.1(-)/porB組、PBS和殼聚糖對照組之間差異具有顯著性(P<0.01);脾淋巴細胞刺激指數(shù)(分別

5、為1.54±0.28和1.63±0.27)明顯高于裸質粒 pcDNA3.1(-)/porB組、殼聚糖組和PBS組(P<0.05);鼻飼途徑的CS-pcDNA3.1(-)/porB組、裸質粒pcDNA3.1(-)/porB組血清 IgG亞類 IgG2a/IgG1比值分別為1.441、1.745,肌注途徑的CS-pcDNA3.1(-)/porB組、裸質粒pcDNA3.1(-)/porB組血清IgG亞類IgG2a/IgG1比值分別為1.387