低溫脅迫下菊花蛋白質(zhì)組的雙向電泳分析與質(zhì)譜鑒定.pdf

1、本研究利用雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)對抗寒性不同的菊花品種進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)的比較分析，以探索菊花的抗寒機(jī)制。實(shí)驗(yàn)選擇不同抗寒性的菊花品種——北京小菊(Dendranthemacv.pekinense，0＃)和地被菊(Dendranthema×morifolium，3＃)，在4℃控溫生長箱中(10h光照)低溫處理0hr、2hr、4hr、12hr、1d、2d、3d后分別取葉片，用Tris飽和酚法提取總蛋白，進(jìn)行單向電泳和雙向電泳分析。對樣品制備、蛋

2、白溶解等技術(shù)環(huán)節(jié)進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn)，摸索了一種適合于菊花葉片全蛋白的提取方法，解決了菊花葉片中多糖、脂類、色素等對雙向電泳嚴(yán)重干擾的問題，同時(shí)確定了一種有效的蛋白質(zhì)裂解液(7mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、4％CHAPS、5mmol·L-1DTT)。葉片全蛋白采用pH3-10的線性IPG干膠條進(jìn)行分離，經(jīng)考馬斯亮蘭染色后，利用ImageMaste-2DElite圖象分析軟件進(jìn)行處理，獲得了重復(fù)性好、分辨率高的蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜，

3、分別得到了500～800多個(gè)可識(shí)別的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)；通過斑點(diǎn)配比，獲得了0＃不同時(shí)間低溫處理下的差異蛋白54個(gè)，3＃不同時(shí)間低溫處理下的差異蛋白52個(gè)，以及這兩種耐寒性不同的菊花品種在相同低溫處理時(shí)間下的差異蛋白7個(gè)；分別對這些差異蛋白進(jìn)行肽質(zhì)量指紋圖譜分析，共獲得了63個(gè)較好的肽質(zhì)量指紋圖譜。鑒定了12個(gè)蛋白差異點(diǎn)，分別為多聚半乳糖醛酸酶、甘氨酸結(jié)合蛋白、果糖1，6-二磷酸醛縮酶、轉(zhuǎn)錄因子MYB家族、鈣調(diào)素蛋白受體激酶、磷酸甘油酸變位酶、