鵝掌揪葉片發(fā)育相關(guān)蛋白的雙向電泳分析.pdf

1、該文對(duì)ISO-DALT進(jìn)行了優(yōu)化,建立了適合木本植物葉片蛋白質(zhì)分析的雙向電泳技術(shù)體系,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)三氯乙酸/丙酮制干粉提取法是鵝掌楸葉片蛋白樣品處理的較為優(yōu)化的方法.(2)確立了一套較為優(yōu)化的等電聚焦程序,在相對(duì)密閉的條件下,可以減少電泳系統(tǒng)對(duì)CO2的吸收,同時(shí)采用最佳的等電聚焦時(shí)間,使陰極漂移的現(xiàn)象大大減弱.(3)平衡的時(shí)間以25-30分鐘為佳,測(cè)量pH梯度時(shí)標(biāo)樣法要優(yōu)于浸泡法.從該文的電泳圖譜可以發(fā)現(xiàn),ISO-DALT技術(shù)體

2、系也能夠得到比較穩(wěn)定的電泳圖譜,完全可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)的要求.利用優(yōu)化的ISO-DALT技術(shù),對(duì)鵝掌楸葉片生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程進(jìn)行了雙向電泳分析,發(fā)現(xiàn):(1)鵝掌楸葉片蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的分子量范圍是12.7kD-101.8kD,等電點(diǎn)范圍為3.2-7.9,絕大部分斑點(diǎn)主要集中于分子量范圍為13.5kD-82kD,等電點(diǎn)范圍為3.8-7.0的區(qū)域內(nèi).大部分蛋白質(zhì)在葉片不同發(fā)育階段中都穩(wěn)定表達(dá),有一些蛋白質(zhì)具有發(fā)育階段表達(dá)特異性.(2)蛋白斑點(diǎn)(56.5kD,

3、pI3.6)和(28kD,pI3.3)在葉片迅速擴(kuò)展階段特異出現(xiàn),這些蛋白質(zhì)與此發(fā)育階段密切相關(guān).而蛋白斑點(diǎn)(39.9kD,pI5.0)、(39.9kD,pI5.12)、(38.5kD,pI5.0)和(38.5kD,pI5.12)從迅速擴(kuò)展期到成熟期逐漸消失,且消失過(guò)程具有同步性.(3)5月到6月的成熟期葉片蛋白質(zhì)變化比較明顯,蛋白斑點(diǎn)(53 kD,pI5.95)的豐度明顯下調(diào),與黃化期蛋白質(zhì)變化相比較后可以發(fā)現(xiàn),斑點(diǎn)(18.6 kD,