桃果實(shí)發(fā)育硬核期蛋白質(zhì)雙向電泳方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)是生命功能的執(zhí)行體，蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。雙向電泳作為蛋白質(zhì)組研究的三大核心技術(shù)之一，是目前常用的唯一一種能夠連續(xù)在一塊膠上分離數(shù)千種蛋白質(zhì)的方法，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究的各個(gè)方面。隨著桃果實(shí)表達(dá)序列標(biāo)簽的完善，桃果實(shí)發(fā)育的功能基因組學(xué)研究迎來了新的機(jī)遇。本實(shí)驗(yàn)以“久?！碧?Prunus persicaL．cv．Okubao)中果皮為試材，通過比較不同上樣量、不同上樣緩沖液、不同膠條平衡緩

2、沖液、不同pH范圍固相pH梯度(immobilized pH gradients，IPG)膠條、不同染色方式等因素對雙向電泳圖譜效果的影響，試圖建立一套適用于桃果實(shí)蛋白質(zhì)組學(xué)分析的雙向電泳方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明采用17cm的IPG膠條，90μg蛋白上樣量，樣品干粉溶于375μL含有尿素、硫脲、CHAPS、磺基三甲基胺乙內(nèi)脂10、兩性電解質(zhì)等成分的水化上樣緩沖液中，等電聚焦后用含有磷酸三丁酯的膠條平衡緩沖液一步平衡，進(jìn)行十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰

3、胺凝膠電泳，考馬斯亮藍(lán)染色后的電泳圖譜效果較好，但銀染色得出的雙向電泳圖含有更多的蛋白質(zhì)點(diǎn)，且背景清晰，適用于桃果實(shí)蛋白質(zhì)組分析。繼而采用pn 5.0～8.0的17 cmIPG膠條并應(yīng)用以上方法對桃果實(shí)發(fā)育過程中硬核期的中果皮和內(nèi)果皮進(jìn)行蛋白質(zhì)雙向電泳分析，發(fā)現(xiàn)中果皮雙向電泳圖譜含有蛋白質(zhì)點(diǎn)1318±125個(gè)，內(nèi)果皮雙向電泳圖譜含有蛋白質(zhì)點(diǎn)1415±133個(gè)，兩張圖譜相比較至少存在24.77﹪的差異，隨后的蛋白質(zhì)鑒定將利用基質(zhì)輔助激光解