葡萄白粉病侵染過程和葡萄蛋白質(zhì)雙向電泳體系的建立.pdf

1、本試驗以抗白粉病的中國野生葡萄品種白河-35-1、感白粉病的歐洲葡萄品種佳利釀及其二者的Fl抗病株系6.12-4和感病系6-12-2為材料，通過考馬斯亮藍(lán)R-250染色和解剖觀察統(tǒng)計葉片的自然帶菌率，比較了田間人工接種白粉菌0d，1d，3d，5d和7d后病原菌在葉片表面的生長和侵染過程，以探明葡萄白粉病侵染過程中病原與植物互作的關(guān)鍵時期。并利用白粉菌誘導(dǎo)后6-12-2為材料，比較了3種蛋白質(zhì)提取方法，建立適用于葡萄葉片總蛋白質(zhì)提取和雙向

2、電泳的最佳體系。 田間自然條件下和田間人工套袋隔離2w后，葡萄抗、感白粉病植株的新稍葉片均存在自然帶菌現(xiàn)象，但抗病植株帶菌率較低。人工壓片接種后，菌絲和分生孢子成功附著在感病和抗病植株的葉片表面。隨著接種后時間的增加，不同抗病性葡萄葉片表面白粉菌的數(shù)量均緩慢增加；接種3d后感病植株葉片表面的菌絲數(shù)量快速增加，并表現(xiàn)出白粉癥狀；但抗病葡萄植株表面的菌絲數(shù)量增加仍然較慢，不表現(xiàn)白粉癥狀；對感病材料病斑部位進(jìn)行顯微觀察發(fā)現(xiàn)，葡萄白粉病

3、的侵染過程為：分生孢子萌發(fā)形成芽管，然后在芽管頂端萌發(fā)形成附著胞，附著胞下方長出侵染絲并侵入葉片，完成侵染過程。葡萄白粉病原與寄主識別反應(yīng)的關(guān)鍵時期在接種后3d內(nèi)；白粉病人工接種前保持至少2w的隔離是必要的。 在三種蛋白提取方法中，Tri-reagent法提取葡萄葉片蛋白質(zhì)的產(chǎn)率為3.3606mg/g·FW，木本植物改良法提取的產(chǎn)率為6.8526mg/g·FW，改良丙酮-三氯乙酸法提取蛋白質(zhì)的產(chǎn)率為14.8493 mg/g·FW

4、。改良后的丙酮．三氯乙酸法的提取率最高，同時電泳圖譜可以分辨出葡萄葉片蛋白質(zhì)斑點數(shù)857個，主要分布在pH4-pH8的范圍內(nèi)。綜合分析凝膠的蛋白質(zhì)斑點信息，改良后的丙酮．三氯乙酸法為最佳提取方法。優(yōu)化后的雙向電泳體系為：IPG膠條在室溫下主動水化1 h。17℃條件下，采取250V、500V和1000V三個除鹽梯度進(jìn)行除鹽，然后進(jìn)行等電聚焦。在15 mA/gel的電流強(qiáng)度下進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié)束后采用(NH4)2SO4與H3PO4