干旱脅迫下棉花蛋白質(zhì)組雙向電泳體系構(gòu)建與差異表達(dá)蛋白功能分析.pdf

1、新疆是我國(guó)最大的產(chǎn)棉區(qū),但是地處內(nèi)陸地區(qū),常年的干旱少雨氣候,嚴(yán)重制約了新疆棉花的生長(zhǎng)。因此,深入研究棉花的抗旱機(jī)理,探求棉花抗旱本質(zhì),從而選育出高抗旱的棉花品種是新疆棉花生產(chǎn)中急需解決的問(wèn)題。傳統(tǒng)的抗旱性研究多集中在核酸水平,很難從根本上揭示棉花的抗旱機(jī)制。眾所周知,蛋白質(zhì)才是生命活動(dòng)的執(zhí)行者,直接體現(xiàn)各種生命現(xiàn)象。所以,研究干旱脅迫下棉花蛋白質(zhì)水平的差異性,并結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學(xué)知識(shí),對(duì)理解棉花抗旱機(jī)理,進(jìn)而指導(dǎo)棉花抗旱育種具有

2、極其重要的意義。
　　本論文以PEG脅迫處理的苗期棉花為材料,利用雙向電泳技術(shù),研究不同處理?xiàng)l件下棉花葉片蛋白質(zhì)組的表達(dá)差異。將差異明顯的蛋白點(diǎn)進(jìn)行切割,然后進(jìn)行肽指紋圖譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),結(jié)合生物信息學(xué)知識(shí)分析這些差異蛋白與棉花抗旱性的內(nèi)在聯(lián)系。本研究在蛋白質(zhì)水平上探求了棉花的抗旱機(jī)理,以期為棉花的抗逆研究和培育高抗旱的棉花新品種提供幫助。本論文研究結(jié)果如下:
　　1.比較酚法、TCA/丙酮法以及改良的TCA/丙酮法,得出

3、改良的TCA/丙酮法最適合棉花葉片總蛋白質(zhì)的提取。
　　2.當(dāng)裂解緩沖液中含有7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4％CHAPS、80mmol/LDTT、1mmol/LPMSF、0.3%載體兩性電解質(zhì)時(shí),蛋白質(zhì)樣品得到了很好的溶解。硝酸銀染色法適用于分析膠的制備,而考馬斯亮藍(lán)法制備的膠與質(zhì)譜兼容性較好。當(dāng)選用24cm,pH4-7的IPG膠條,上樣量為600μg時(shí),得到了質(zhì)量較高的雙向電泳圖譜。
　　3.將差異明顯的113個(gè)蛋