小細胞肺癌血漿差異蛋白的雙向電泳-質譜分析.pdf

1、目的:本研究應用雙向熒光差異凝膠電泳(two-dimensional fluorescencedifference gel electrophoresis,2-D DIGE)和液相色譜質譜聯(lián)用(Liquidchromat ography masss pectrometry簡稱LC-MS/MS)方法,研究小細胞肺癌患者與健康對照者血漿蛋白質組表達的差異;尋找并鑒定與小細胞肺癌癌變相關的蛋白。
　　 方法:以小細胞肺癌患者及健康者血

2、漿為研究對象,應用ExtractAlbumin/IgG Removal Kit,2D Clean-up Kit試劑盒,對血漿樣品進行預處理;采用雙向熒光差異凝膠電泳實驗方法,對其各組樣品進行熒光標記后,行一向固相梯度等電聚焦電泳(Isoelectric focusing簡稱IEF)和二向SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳(Polyaerylamide gel electrophoresis簡稱SDS-PAGE);應用Typhoon9400激光

3、掃描儀成像,得到不同通道的蛋白質組圖;采用DeCyder6.5軟件進行分析,找到其具有統(tǒng)計學意義的差異蛋白點;應用液相色譜質譜(LC-MS/MS)獲得肽質量指紋圖;通過搜索NCBIpro蛋白質數(shù)據(jù)庫,鑒定與腫瘤相關蛋白質。
　　 結果:
　　 1.采用優(yōu)化的雙向熒光差異凝膠電泳技術獲得了重復性良好的小細胞腫癌患者和健康者的血漿蛋白質2-D DIGE圖譜:結合Dccyder6.5分析軟件,發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)

4、的蛋白點共有147個,選取85個蛋白點行質譜鑒定,其中在小細胞肺癌中上調的蛋白點有16個(334、324、431、443、446、451、465、488、517、695、696、740、768、966、970、971),443、465可找到相匹配的蛋白:下調蛋白點有25個(178、179、248、253、257、258、390、400、515、527、548、569、570,571,572、574、576、577、578、581、585

5、、594、596、604、880),178、179、248、257、400、515、572、585可找到其相匹配的蛋白,其它的蛋白點均為未知蛋白質。
　　 2.經(jīng)過NCBIpro蛋白質數(shù)據(jù)庫檢索分析,根據(jù)其分子量、等電點及得分,鑒定其下調蛋白部分為:Alpha-2-macroglobulin,Pregnancyzoneprotein;Complement C3,Cemloplasmin;Serotransferrin,Hemop

6、exim,Iggamma-3 chain C,haptoglobin等;鑒定其上調蛋白為:Complemem C9,Angiotensinogen;目前尚存在一些蛋白點在蛋白數(shù)據(jù)庫中未找到其相匹配的蛋白質,由于雙向凝膠電泳的分辨力,或質譜分析敏感性的限制,以及部分蛋白質可能是未發(fā)現(xiàn)的新蛋白,有待進一步研究。
　　 結論:
　　 1.應用雙向熒光差異凝膠電泳聯(lián)合液相色譜質譜技術成功的篩選并鑒定出了小細胞肺癌患者和健康人血漿