基于雙向電泳技術(shù)的針刺對失眠模型大鼠腦組織蛋白差異表達的影響.pdf

1、　　目的：
　　利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法,通過雙向電泳分離技術(shù),構(gòu)建失眠模型大鼠腦組織蛋白質(zhì)差異表達圖譜,尋找針刺提高睡眠質(zhì)量的相關(guān)蛋白,比較各組間蛋白質(zhì)的表達差異,為探討針刺治療失眠的作用機制提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1. 選用150只清潔級雄性SD大鼠,隨機分為五組,正常飼養(yǎng)1周后,各組大鼠按以下方法進行處理：空白對照組不予任何處理；正常捆綁對照組每日行抓取處理,連續(xù)9天；正常針刺治療組每日行抓取處理,

2、第 3天開始針刺,連續(xù)針刺7天；模型對照組每日上午腹腔注射對氯苯丙氨酸混懸液 lml/100g,連續(xù)注射2 日,第 3 天開始只抓取,不予針刺,連續(xù)抓取 7 天；模型針刺治療組每日上午腹腔注射對氯苯丙氨酸混懸液 lml/100g,連續(xù)注射2日,第3天開始抓取并針刺,連續(xù)針刺7天；
　　2.造模結(jié)束后將大鼠斷頭,取出腦組織,分別提取五組大鼠全腦總蛋白,測定其蛋白濃度；
　　3.采用雙向電泳技術(shù)純化分離出大鼠腦組織內(nèi)的蛋

3、白質(zhì),然后進行考馬斯亮蘭染色,掃描凝膠圖像并獲取蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜；
　　4.應(yīng)用2-DE圖譜分析軟件“ImageMaster 2D Platinum”對雙向凝膠電泳圖譜進行分析,尋找出五組間差異表達的蛋白質(zhì)。
　　結(jié)果：
　　1. 獲得5組重復(fù)性較好的雙向電泳圖譜；
　　2. 經(jīng)“ImageMaster 2D Platinum”軟件分析,5組凝膠獲得的平均蛋白質(zhì)點數(shù)分別為241、295、30

4、5、298、294,其平均匹配率分別為70.8%、72.96%、74.23%、81.82%、75.27%,蛋白質(zhì)在凝膠位置上有很好的重復(fù)性；
　　3. 經(jīng)差異分析空白對照組和正常捆綁對照組共有 21 個差異表達的蛋白質(zhì)點,空白對照組和正常針刺治療組之間找到 12個差異表達的蛋白質(zhì)點,空白對照組和模型對照組共有 14個有差異的蛋白質(zhì)點,空白對照組和模型針刺治療組共有16差異表達的蛋白點,正常捆綁對照組和正常針刺治療組之間找到 9

5、個有差異蛋白質(zhì)點,正常捆綁對照組和模型對照組之間共有 8個差異表達的蛋白質(zhì)點,正常捆綁對照組和模型針刺治療組之間找到17個有差異的蛋白質(zhì)點,正常針刺治療組和模型對照組之間找到4個有差異的蛋白質(zhì)點,正常針刺治療組和模型針刺治療組共有 8 個差異表達的蛋白質(zhì)點,模型對照組和模型針刺治療組之間共找到 11個有差異的蛋白質(zhì)點。
　　結(jié)論：
　　本研究采用雙向電泳技術(shù)對大鼠腦組織蛋白質(zhì)進行研究,建立了穩(wěn)定性重復(fù)性良好的失眠大鼠