利用雙向電泳和質譜技術篩選矽肺血清差異蛋白.pdf

1、矽肺是由于長期吸入游離二氧化硅(SiO<,2>)粉塵所引起的以肺間質纖維化為主的全身性疾病，是常見的、危害最嚴重的職業(yè)病之一，病情嚴重、死亡率高。停止粉塵暴露，病程依然進展。2005年全國各類職業(yè)病報告12 212例，其中塵肺病病例報告9 173例，而矽肺病例占塵肺總病例約50％。矽肺所造成的經(jīng)濟損失十分巨大，據(jù)專家估算，年直接經(jīng)濟損失約90億元人民幣，間接損失更大。由于矽肺發(fā)病迅速，早期診斷和干預尤顯重要。直至現(xiàn)在，矽肺的發(fā)病機理仍然

2、不完全清楚，無早期診斷的特異性標志物，也無特異性的治療藥物和方法。近年來蛋白質組學技術的飛速發(fā)展，為研究疾病發(fā)病機制和探索早期診斷(篩檢)的生物標記物，提供了新的思路和技術平臺。由于矽肺纖維化過程中有許多反應氧物質(reactive oxygen species，ROS)和反應氮物質(reactive nitrogen species，RNS)等氧化劑、炎癥細胞因子、生長因子、凋亡及抗凋亡因子以及有關信號通路的小分子物質參與，這些蛋白質

3、或小分子物質在肺組織中的變化必然會通過相應的途徑釋放至血清，引起其在血清中的濃度變化，同時也會級聯(lián)其它一些相關蛋白質發(fā)生相應變化，從理論上為矽肺的血清差異蛋白質組學研究提供了依據(jù)。本研究采用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質輔助激光解吸飛行時間串聯(lián)質譜(MALDI-TOF-MS/MS)對矽塵暴露人群和對照組人群血清進行比較蛋白質組學研究，尋找矽肺血清差異蛋白，探索早期診斷(篩檢)的生物標記物，以期為預防和早期治療矽肺提供幫助。 目的

4、 建立正常人和矽肺人群血清雙向電泳圖譜，尋找矽肺血清差異蛋白，進一步探索其發(fā)病機制及潛在生物標記物。 方法 按照國家塵肺病診斷標準(GBZ70-2002)，選擇山西省陽泉市某硫鐵礦診斷為矽塵暴露(0)、可疑矽肺(0<'+>)、一期矽肺(Ⅰ)的工人為研究對象。并選擇當?shù)赝挲g組的健康人群作為對照。各組均選取30例研究對象，采用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質輔助激光解吸飛行時間串聯(lián)質譜(MALDI-TOF-MS/MS

5、)技術，對矽塵暴露(0)、可疑矽肺(0<'+>)、一期矽肺(Ⅰ)和對照組人群混和血清進行比較蛋白質組學研究，尋找矽肺發(fā)病過程中血清差異表達蛋白。 結果 初步發(fā)現(xiàn)了補體C4、富亮氨酸α-2糖蛋白、α一1抗胰蛋白酶在O<'+>組血清中表達顯著升高(P<0.01)，在對照組、0組、Ⅰ組中表達均較低；轉鐵蛋白則在0<'+>組血清中表達顯著下調(diào)(P<0.01)。血漿谷胱甘肽過氧化物酶、四連接素、載脂蛋白A-Ⅰ，甲狀腺素運載蛋白在對

6、照組和0組血清中表達相當，隨著肺纖維化的進展，在0<'+>和Ⅰ組中逐漸下降。 結論 1．補體C4、富亮氨酸α-2糖蛋白、α-1抗胰蛋白酶、轉鐵蛋白在可疑矽肺(0<'+>)組血清中表達發(fā)生顯著變化，提示其與矽肺發(fā)病過程中早期的溶細胞及炎癥反應可能存在某種關聯(lián)，并可能具有反映矽肺早期病變的潛在參考價值。 2．血漿谷胱甘肽過氧化物酶、四連接素、載脂蛋白A-Ⅰ和甲狀腺素運載蛋白隨肺纖維化的進展發(fā)生了差異表達，可能與矽肺后