應用飛行質譜技術從血清中篩選腸癌標志蛋白.pdf

1、隨著蛋白組學的提出和人類DNA框架基本完成，生命科學進入了后基因時代。研究目標從單個基因轉向一群基因(基因組)和功能基因，從遺傳信息轉向生物功能，開始從整體組織和細胞內的蛋白質角度研究生命活動的基本規(guī)律。基因組序列翻譯為相應功能蛋白，使生物學功能得以實現(xiàn)。但二維的基因組學難以充分預測蛋白質的三維結構及其動力學，基因本身有多態(tài)性，使基因有多種表型，給單純基因診斷帶來了不確定因素。要徹底了解生命本質，必須了解蛋白質在生命現(xiàn)象中的作用和相應的

2、機制。蛋白結構或量的變化導致了疾病的發(fā)生。機體內絕大多數(shù)調控過程、疾病的發(fā)生機制、藥物的靶標均發(fā)生在蛋白水平。有人認為，后基因組學，特別是蛋白組學將成為21世紀生命科學研究最重要的內容。就臨床角度而言，蛋白組學更具有應用價值。實際應用表明，對如癌癥、心血管病這些多基因疾病，基因診斷陽性率遠低于單基因遺傳性疾病。比較疾病組織和正常組織的蛋白組的差異往往能鑒別出特定疾病對應的特異蛋白，使之成為疾病的標記或藥物的靶分子?，F(xiàn)有的蛋白質分析方法只

3、能檢測1000余種蛋白，按現(xiàn)有技術，大量的可能攜帶疾病信息的蛋白無法檢出。實際上，有效的單一蛋白質標志極少，許多重要的疾病由于缺乏好的標志導致診斷不精確或診斷不及時。許多學者深信，如果能根據(jù)一組蛋白質的變化來判斷疾病，預測和診斷疾病的準確性將大大提高。檢測疾病的蛋白組學變化將比當前常規(guī)檢測、基因檢測更準確、有效。許多疾病將出現(xiàn)新的診斷指標，大大改變當前診斷學的落后狀態(tài)。亞利桑那大學癌癥中心主任Daniel D．Von Hoff認為，應用

4、SELDI-TOF測定蛋白組學最有價值，血清蛋白組學圖譜的應用，將為腫瘤學的理論和實際工作帶來重大影響，在很大程度上改變腫瘤的治療和預防措施。 SELDI-TOF-MS是一種應用特殊的增強表面芯片結合激光解吸離子化飛行時間質譜分析樣品中蛋白質的技術，具有微量、快速、高通量等特點，尤其適于分析低分子量、低豐度的蛋白質。2002年日本田中耕一因發(fā)明該技術而獲取諾貝爾化學獎，SELDI技術發(fā)展十分迅速。本研究是利用SELDI-TOF-

5、MS技術分析腸癌患者與正常人血清中蛋白質成分的變化，以獲得用于腸癌診斷的特異性相關蛋白。 材料與方法： 用美國Ciphergen Biosystems公司金屬螯合表面芯片IMAC-Cu和蛋白芯片儀，檢測結直腸癌患者和正常人血清蛋白質的相對含量，應用Biomarker Wizard軟件分析腸癌組與對照組間相同質荷比的蛋白質峰值表達差異的P值，篩選可用于結直腸癌早期診斷的血清蛋白質特異性生物標志物。 結果：