多維色譜—質(zhì)譜對人血清蛋白組研究及其在腫瘤研究中的應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)組學(xué)及其在腫瘤研究中的應(yīng)用是目前生命科學(xué)中的熱點研究領(lǐng)域。人血清中蛋白質(zhì)數(shù)量極大，是非常理想的生物樣本。但由于血清中高豐度和低豐度蛋白的含量相差大，且許多低豐度的小分子量蛋白/多肽是和高豐度蛋白結(jié)合在一起的，很難檢測。而這些低豐度的小分子量蛋白往往對人體起非常重要的作用。本文應(yīng)用多維色譜和基質(zhì)輔助激光解吸附/電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOFMS)結(jié)合對人血清中的蛋白進行了分離和檢測。通過比較健康人血清和腫瘤患者血清蛋白的差異，

2、篩選出了一些腫瘤標(biāo)志物。本論文包括以下五個部分： 1.文獻綜述。對蛋白質(zhì)組學(xué)作了簡單敘述，介紹了蛋白質(zhì)組學(xué)的內(nèi)容、方法以及研究現(xiàn)狀，重點介紹了人血清蛋白組學(xué)及其在腫瘤研究中的應(yīng)用。 2.實驗部分。介紹了實驗儀器、試劑以及實驗步驟。 3.SEC-RPLC和MALDI-TOFMS對人血清的分離與檢測。用5mol·L-1脲對人血清進行稀釋和變性，以消除血清中蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)/多肽之間的相互作用力，然后用體積排阻色譜(SE

3、C)對變性后血清中的蛋白按其分子量的大小進行分離并富集，得到了分子量較小但種類較多的低豐度蛋白，從而消除了高豐度大分子量蛋白質(zhì)對小分子量蛋白/多肽的影響。經(jīng)過反相色譜(RPLC)進一步分離后，并用MALDI-TOFMS在未酶解的情況下直接分析檢測這些蛋白。在人血清中共檢出300余種低分子量蛋白/多肽(15kDa以下)，同時通過比較變性前后這些蛋白/多肽種類及豐度的變化，得到了80余種與白蛋白相結(jié)合的小分子量蛋白。 4.IEC-R

4、PLC和MALDI-TOFMS對血清中蛋白的分離與檢測。分別用弱陽離子交換色譜、弱陰離子交換色譜對血清作了分離，發(fā)現(xiàn)用弱陰離子交換色譜對血清的分離效果較好。并用反相色譜對離子交換色譜的餾分和餾分的酶解液進行了分離，發(fā)現(xiàn)用反相色譜直接對離子交換色譜的餾分分離的效果不好，將離子交換色譜的餾分酶解后再用反相色譜分離，通過MALDI-TOF質(zhì)譜共測得了700多個肽段。通過比較健康人和腫瘤患者血清中所檢出肽段的差異就可以確定健康人和腫瘤患者血清中

5、蛋白的差異。 5.腫瘤標(biāo)志物的篩選。應(yīng)用上述方法對10例健康人血清和21例胃癌患者血清、6例肺癌患者血清、14例食道癌患者血清中的蛋白進行了分離檢測。通過比較健康人和腫瘤患者血清中蛋白的差異，篩選出了一些腫瘤標(biāo)志物。其中對于胃癌篩選出4種腫瘤標(biāo)志物，質(zhì)荷比為3247，3509，3953，4247。以荷質(zhì)比為3953的一種蛋白為胃癌特異性標(biāo)志物，就能將健康人和胃癌患者正確分組，靈敏度和特異性分別為80.9％(17/21)，100％