用飛行質譜技術篩選肝癌患者血清中特異生物標志物.pdf

1、目的：應用飛行時間質譜技術(SELDI-TOF-MS surfac eenhanced laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry 即表面增強激光解析及電離飛行時間質譜)檢測肝癌患者血清中不同質荷比蛋白質的相對含量，同時建立血清蛋白質組質譜圖，并與肝硬化患者，肝炎患者，及正常人血清蛋白質質譜圖比較，篩選有價值的特異性腫瘤標志物，探討其臨床應用價值。 方法

2、：采用美國Ciphergen公司IMAC3(Immobilized MetalAffinity Capture，金屬親和表面)芯片和飛行時間質譜儀，檢測40例肝癌患者，45例肝硬化患者，75例肝炎患者，和120例正常人血清中的蛋白質相對含量。采用PBS Ⅱ型蛋白質芯片閱讀儀對所有樣本飛行結果進行閱讀并建立數據庫，同時轉化為波譜的形式表示。將四組血清檢測得到的蛋白質波譜按：1、肝癌和正常人；2、肝癌和肝硬化；3、肝癌和肝炎；4、肝癌、肝炎

3、和正常人等分為四種不同的對比組合。然后采用BiomarkerWizard統計軟件對其進行方差分析，將分析所得到的含量有顯著性差異(P<0.0 5)的蛋白質建立數據庫，導入BiomarkerPattern智能統計分析軟件，選擇相應條件，對其進行分組統計挖掘，從而得到能夠正確分組的特異性蛋白標志物并構建肝癌診斷模型。另外采用放射免疫定量法隨機檢測部分血清標本中的CA19-9、FE蛋白及AFP的含量，按其臨床通用標準進行篩檢判定，并和芯片檢測

4、結果進行對比。 結果：①在肝癌和正常人對比中，我們共發(fā)現47個含量有差異的蛋白，其中6個蛋白的相對含量在肝癌中明顯上調，44個明顯下調。用Biomarker Pattern軟件進行統計分析，建立的診斷模型診斷準確度為100﹪(150/150)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為100﹪(114/114)。②在肝癌和肝炎組對比中，我們共發(fā)現23個含量有差異的蛋白，其中2個蛋白的相對含量在肝癌中明顯上調，21個明顯下調。用Bi

5、omarker Pattern軟件進行統計分析，建立的診斷模型診斷準確度為94.44﹪(102/108)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為91.67﹪(66/72)。③在肝癌和肝硬化組對比中，我們共發(fā)現15個含量有差異的蛋白，其中7個蛋白的相對含量在肝癌中明顯上調，8個明顯下調。用Biomarker Pattern軟件進行統計分析，建立的診斷模型診斷準確度為94.94﹪(75/79)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為90

6、.70﹪(39/43)④在肝癌和肝炎以及正常人組對比中，我們共發(fā)現19個含量有差異的蛋白。用BiomarkerPattern軟件進行統計分析，建立的診斷模型診斷準確度為98.65﹪(219/222)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為98.39﹪(183/186)。⑤對照應用CA19-9、FE蛋白及AFP等單一腫瘤標志物對部分樣本隨機進行試驗診斷，發(fā)現SELDI-TOF-MS有更好的診斷效力。 結論：蛋白芯片飛行時間質譜儀聯