仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導(dǎo)HSV-2靶基因的免疫學(xué)效果研究.pdf

1、中國藥品生物制品檢定所碩士研究生學(xué)位論文中國藥品生物制品檢定所碩士研究生學(xué)位論文仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究姓名：付志浩仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究姓名：付志浩學(xué)號：845030610010201學(xué)號：845030610010201專業(yè)：免疫學(xué)專業(yè)：免疫學(xué)導(dǎo)師姓名：王軍志研究員導(dǎo)師姓名：王軍志研究員指導(dǎo)教師：饒春明研究員指

2、導(dǎo)教師：饒春明研究員李永紅副研究員李永紅副研究員二00九年七月二00九年七月中國藥品生物制品檢定所碩士學(xué)位論文1仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究研究生：付志浩導(dǎo)師：王軍志研究員摘要摘要仙臺病毒（SendaiVirusSeV）屬于副粘病毒科呼吸道病毒屬，基因組為不分節(jié)段的單負鏈RNA，編碼NP，P，M

3、，F(xiàn)，HN，L等11個蛋白。應(yīng)用仙臺病毒改造的F基因缺失型仙臺病毒載體（SendaivirusVectSeV）是新興的RNA病毒載體，由于其宿主范圍廣、表達量高、胞質(zhì)表達、安全性好等諸多優(yōu)點，目前廣泛用于基因治療藥物和疫苗研究。本課題上篇為針對一種仙臺病毒基因治療產(chǎn)品（攜帶hFGF2外源基因的F基因缺失型仙臺病毒，SeVhFGF2dF）及其包裝細胞庫（導(dǎo)入F基因的恒河猴腎細胞，LLCMK2F）的質(zhì)量控制研究。其中產(chǎn)品質(zhì)量控制研究主要包括

4、結(jié)構(gòu)確認、純度、病毒滴度、體外表達和生物學(xué)活性以及特殊殘留物質(zhì)檢測，在該部分的研究過程中，建立了兩個易于標準化和精確度較高的方法，其中一項為“應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測病毒載體類基因治療藥物感染滴度”，該方法通過建立適合病毒感染細胞特點的數(shù)學(xué)模型和相應(yīng)操作流程，并確定了方法質(zhì)控指標，結(jié)果證實該數(shù)學(xué)模型適合病毒感染細胞的特點，所得結(jié)果重現(xiàn)性良好。另一項方法學(xué)研究為“應(yīng)用PicoGreen熒光法檢測DNA殘留”，通過加標回收率對結(jié)果進行校正，證實該

5、方法較傳統(tǒng)的斑點雜交法定量準確，且操作簡便，靈敏度高。細胞庫的質(zhì)量控制研究主要包括細胞鑒別，內(nèi)外源病毒因子檢測，逆轉(zhuǎn)錄酶檢測等。其中細胞鑒別實驗藥典三部無明確方法細則，本部分方法學(xué)研究通過DNA指紋圖譜、同工酶檢測和細胞表面F蛋白檢測，從遺傳，生化酶學(xué)以及重組細胞目的蛋白三方面對細胞進行有效鑒別。課題的下篇為仙臺病毒載體介導(dǎo)Ⅱ型單純皰疹病毒（HSV2）靶基因的免疫學(xué)效果研究，首先選取HSV2的糖蛋白D（gD）和核蛋白ICP27由課題合作