小鼠4、8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本制備的研究.pdf

1、染色體是生物遺傳的物質(zhì)載體，在生物的世代相傳過(guò)程中表現(xiàn)出高度的穩(wěn)定性和物種特異性。通過(guò)染色體分析，可為研究物種的起源進(jìn)化、品種的形成和基因的定位提供細(xì)胞遺傳學(xué)方面的基本資料。本實(shí)驗(yàn)以昆明小鼠4、8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球?yàn)檠芯繉?duì)象，以CZB培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，采用空氣干燥法制備單卵裂球的染色體標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)中分別添加不同濃度的兩種紡錘體阻斷劑——秋水仙素和長(zhǎng)春花堿進(jìn)行不同阻斷培養(yǎng)時(shí)間的實(shí)驗(yàn)以確定阻斷劑的最佳處理濃度和時(shí)間，并以不同低滲液對(duì)胚胎進(jìn)

2、行低滲處理以確定最佳的低滲液種類，從而獲得了理想的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，進(jìn)一步對(duì)得到的中期分裂相進(jìn)行了分級(jí)評(píng)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1、在確定秋水仙素不同處理濃度和時(shí)間對(duì)小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，阻斷培養(yǎng)2小時(shí)組中0.6μg/ml濃度組與其他三組差異顯著(0.2μg/ml組、0.4μg/ml組和0.8μg/ml組)；阻斷培養(yǎng)4小時(shí)組中0.4μg/ml濃度組與其他三組差異顯著：阻斷培養(yǎng)6小時(shí)組中0.6μg/

3、ml濃度組與其他三組差異顯著；阻斷培養(yǎng)8小時(shí)組中0.4μg/ml濃度組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況，適宜制備小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的秋水仙素的處理濃度和時(shí)間是0.6μg/ml和6小時(shí)。 2、在確定秋水仙素不同處理濃度和時(shí)間對(duì)小鼠8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，阻斷培養(yǎng)2小時(shí)組中四個(gè)濃度組差異均不顯著；阻斷培養(yǎng)4小時(shí)組中0.2μg/ml濃度組與其他三組差異顯著；

4、阻斷培養(yǎng)6小時(shí)組中四個(gè)濃度組差異均不顯著；阻斷培養(yǎng)8小時(shí)組中0.4μg/ml濃度組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況，適宜制備小鼠8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的秋水仙素的處理濃度和時(shí)間是0.2μg/ml和6小時(shí)。 3、在確定長(zhǎng)春花堿不同處理濃度和時(shí)間對(duì)小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，阻斷培養(yǎng)0.1μg/ml濃度組中10小時(shí)組與其他三組差異顯著(4小時(shí)組、6小時(shí)組和8小時(shí)組

5、)；阻斷培養(yǎng)0.8μg/ml濃度組中8小時(shí)組和10小時(shí)組間差異不顯著，但與其他兩組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.5μg/ml濃度組中10小時(shí)組與6小時(shí)組差異不顯著，而與其他兩組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.7μg/ml濃度組中8小時(shí)組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況，適宜制備小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的長(zhǎng)春花堿的處理濃度和時(shí)間是0.1μg/ml和8小時(shí)。 4、在確定長(zhǎng)春花堿不同處理濃度和時(shí)間對(duì)小鼠8-細(xì)胞期胚胎

6、單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，阻斷培養(yǎng)0.1μg/ml濃度組中10小時(shí)組與其他三組差異顯著：阻斷培養(yǎng)0.3μg/ml濃度組中8小時(shí)組和10小時(shí)組間差異不顯著，但與其他兩組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.5μg/ml濃度組中10小時(shí)組與其他三組差異顯著；阻斷培養(yǎng)0.7μg/ml濃度組中10小時(shí)組與其他三組差異顯著(P<0.05)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況，適宜制備小鼠8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本的長(zhǎng)春花堿的處理濃度和時(shí)間是0.1μg/

7、ml和10小時(shí)。 5、在確定不同種類低滲液處理對(duì)小鼠4、8-細(xì)胞期胚胎單卵裂球中期分裂相數(shù)影響的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，0.45％氯化鈉低滲液組與其他兩組(0.5％檸檬酸鈉和0.35％氯化鉀)差異顯著(P<0.05)。低滲液選用0.45％氯化鈉時(shí)，低滲效果優(yōu)于選用0.5％檸檬酸鈉和0.35％氯化鉀的。 6、在利用最佳參數(shù)制備小鼠4-細(xì)胞期胚胎單卵裂球染色體標(biāo)本時(shí)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，兩種阻斷劑的作用效果差異不顯著；而在制備小鼠8