小鼠4-細胞期胚胎單卵裂球體外發(fā)育潛能研究.pdf

1、人類胚胎來源短缺及研究過程毀壞胚胎引起廣范的倫理爭議，制約著干細胞研究及再生醫(yī)學的發(fā)展，許多科學家正尋找新的干細胞來源。早期胚胎活檢單卵裂球并在體外發(fā)育建系可以獲取ESC，這種方法不破壞胚胎發(fā)育潛力，很大程度降低了倫理爭議，本研究通過對小鼠4-細胞期胚胎單卵裂球發(fā)育潛能的研究，為人類單卵裂球體外發(fā)育及建系的研究探索條件，建立技術平臺。 目的： 研究小鼠4-細胞期胚胎單卵裂球(4-cell Stage Mice Embry

2、o Derived-blastomeres,4c-MEDB)體外發(fā)育的潛能，為人類胚胎單卵裂球體外發(fā)育及建系研究提供技術平臺。 方法： 將小鼠4-細胞期胚胎用酶消化法或機械分割法分離產(chǎn)生單個卵裂球，在體外無透明帶培養(yǎng)條件下，未加任何特殊生長因子，觀察其發(fā)育潛能及特性，并將得到的囊胚與正常囊胚進行形態(tài)學、免疫學比較，最后將4-細胞期胚胎單卵裂球來源囊胚(Individual Blastomere Derived-blast

3、ocysts，4c-IBDB)移植到假孕母鼠子宮中，觀察其繼續(xù)發(fā)育情況。 結果： (1).體外無透明帶培養(yǎng)條件下，4c-MEDB具有發(fā)育成為完整囊胚的潛能，但較正常胚胎發(fā)育滯后，囊胚獲得率低；（2）.4c-IBDB內(nèi)具有Oct-4陽性表達細胞，但較正常囊胚少；(3).4c-IBDB移植入假孕小鼠子宮后具有一定發(fā)育能力，能發(fā)育到原條期，但無法獲得足月妊娠。 結論： 在未添加任何特殊生長因子的體外無透明帶培養(yǎng)條