標(biāo)本配穴電針對慢性心肌缺血模型大鼠心室重構(gòu)的影響研究.pdf

1、目的：
　　心肌缺血屬于心血管疾病中威脅當(dāng)代人類生命和健康的主要因素，現(xiàn)呈年輕化方向發(fā)展，死亡率呈上升趨勢。針刺防治心肌缺血，一直為當(dāng)代學(xué)者研究熱點(diǎn)，但其防治疾病的作用機(jī)制仍不明確，一定程度上影響了針灸在心肌缺血臨床的應(yīng)用及推廣。
　　相關(guān)研究表明，在心肌缺血的過程中心室會發(fā)生重構(gòu)，其中包括血管重構(gòu)和電重構(gòu)兩個方面。在本課題中，選用慢性心肌缺血大鼠為模型作為研究對象，在中醫(yī)治未病理論的指導(dǎo)下，根據(jù)標(biāo)本配穴法進(jìn)行腧穴配伍，以心

2、室重構(gòu)為切入點(diǎn)，運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡（Western blot）及免疫組化等技術(shù)，觀察標(biāo)本配穴電針對血管重構(gòu)及電重構(gòu)的影響，探討標(biāo)本配穴電針防治慢性心肌缺血的作用機(jī)制，為針刺防治慢性心肌缺血提供科學(xué)實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.選取SPF級Wistar大鼠雄性60只，隨機(jī)分為4組：正常組（Control）、模型組（CMI）、內(nèi)關(guān)治療組(CMI+PC6)、標(biāo)本配穴治療組（CMI+EA），每組15只。CMI、CMI+PC6、CMI+

3、EA組均采用連續(xù)14天腹部皮下注射ISO（0.004ml/g）。Control組給予連續(xù)14天等量0.9％生理鹽水腹部皮下注射。于第一天、第22天采用BL-420生物機(jī)能實驗系統(tǒng)檢測，觀察ST段電壓振幅變化，以CMI組大鼠心電圖中ST段抬高≥0.1mv或者下移≥0.05mv作為造模成功的標(biāo)志。
　　2.Control組、CMI組大鼠只抓取固定，不針刺治療。CMI+PC6組大鼠針刺雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴，CMI+PC6組在內(nèi)關(guān)穴右旁開0.5cm

4、處另皮下淺刺一針作輔助電極，與內(nèi)關(guān)穴組成一對電極，CMI+EA組大鼠針刺雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴、雙側(cè)足三里穴及關(guān)元穴，CMI+EA組同側(cè)穴位組成一對電極，在關(guān)元穴右旁開0.5cm處另皮下淺刺一針作輔助電極，與關(guān)元穴組成一對電極，連接HANS-200電針治療儀，連續(xù)波，頻率2Hz，強(qiáng)度1mA，以大鼠肢體有震顫感為適宜強(qiáng)度，通電10min。每日治療1次，共21天。
　　3.第22天，10%水合氯醛麻醉大鼠，仰臥固定于鼠板上，心前區(qū)剃毛，應(yīng)用Agi

5、lent Sonos5500型彩色超聲心動圖診斷儀，10S探頭，頻率為8 MHz，對大鼠的心臟大小及功能進(jìn)行檢測。檢測指標(biāo)包括：左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)，并計算出左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF,%）。
　　4.觀察造模期及治療期大鼠死亡情況，計算大鼠死亡率。并第22天心臟取材，用蛋白質(zhì)印跡法檢測蛋白VEGF、HIF-1α、Cx43表達(dá)，免疫組化檢測心肌缺血組織中Cx43的分布，HE染色檢測心肌缺血面積

6、。取血用于Elisa檢測血清MOD含量、SOD活力及VEGF含量，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計和分析。
　　結(jié)果
　　1.（1）與Control組比較，CMI組大鼠死亡率升高，具有非常顯著性差異（P<0.01）。（2）造模后，CMI大鼠ST段電壓明顯高于Control組，具有非常顯著性差異（P<0.01）；CMI+PC6組大鼠ST段電壓低于CMI組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；CMI+EA組大鼠ST段電壓低于CMI，具有非常顯著性差

7、異（P<0.01）。（3）CMI組大鼠的LVEDD、LVESD均高于Control組，具有非常顯著性差異（P＜0.01），LVEF低于Control組，具有非常顯著性差異（P＜0.01）。CMI+PC6、CMI+EA組大鼠的LVEDD值、LVESD值均低于CMI組，具有非常顯著性差異（P＜0.01），LVEF值均高于CMI組，具有非常顯著性差異（P＜0.01）；CMI+EA組中LVEDD值低于CMI+PC6組，具有非常顯著性差異（P＜0

8、.01）；CMI+EA組中LVESD值低于CMI+PC6組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），LVEF值高于CMI+PC6組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。（4）CMI大鼠MDA含量高于正常組（P<0.05），總SOD活力低于正常組（P<0.05）；CMI+PC6、CMI+EA組大鼠與CMI大鼠比較MDA、總SOD活力含量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；CMI+EA大鼠與CMI+PC6比較總SOD活力含量有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）

9、。
　　2.（1）與Control組比較，CMI組大鼠血清中VEGF的含量升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與CMI組比較，CMI+PC6組大鼠的血清中VEGF含量升高，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；CMI+EA組大鼠血清中VEGF含量明顯高于CMI組，比較差異有非常顯著性差異（P<0.01）；CMI+EA與CMI+PC6組大鼠血清中VEGF含量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。（2）CMI組大鼠的 IS/LV、AAR

10、/LV比值均高于Control組，差異具有非常顯著性意義（P<0.01）；CMI+PC6、CMI+EA組大鼠的IS/LV、AAR/LV比值均低于CMI組，差異具有非常顯著性意義（P<0.01）；CMI+EA組大鼠IS/LV、AAR/LV比值低于CMI+PC6組，差異具有非常顯著性意義（P<0.01）。應(yīng)用HE染色， CMI組心肌嚴(yán)重受損，心肌細(xì)胞肥大，肌漿凝聚，呈強(qiáng)嗜酸性染色（深紅），肌纖維排列紊亂，甚至出現(xiàn)扭曲，間隙增寬，心肌纖維化，

11、細(xì)胞核破裂、溶解，分布混亂；CMI+PC6組心肌缺血情況明顯改善，心肌細(xì)胞較為整齊，局部纖維化減少，細(xì)胞核溶解減少；CMI+EA組較CMI組明顯改善。（3）與Control組比較，CMI組VEGF、HIF-1α蛋白灰度值比值上調(diào)，有非常顯著學(xué)差異(P<0.01)；CMI+EA組的VEGF、HIF-1α蛋白灰度值比值高于CMI組，有非常顯著學(xué)差異(P<0.01)；CMI+PC6組HIF-1α蛋白灰度值比值與CMI組比較有非常顯著性差異（P

12、<0.01）；CMI+PC6組與CMI+EA組比較VEGF蛋白灰度值比值有非常顯著性差異（P<0.01），比較HIF-1α蛋白灰度值比值有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.（1）與Control組比較，CMI組 Cx43蛋白水平表達(dá)降低，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；CMI+EA組與CMI組比較Cx43蛋白水平表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；與CMI+EA組比較，CMI+PC6組Cx43蛋白表達(dá)低于CMI+EA組，有統(tǒng)計學(xué)差

13、異（P<0.05）。（2）Control組大鼠心肌Cx43呈線性規(guī)律分布于心肌細(xì)胞閏盤處端端連接處，少量位于細(xì)胞膜側(cè)面；CMI大鼠心肌Cx43深棕色顆粒分布明顯散亂、稀疏，端端連接處明顯減少，分布側(cè)邊化；CMI+PC6較CMI組大鼠心肌端端之間連接增多，也有部分分布側(cè)側(cè)連接處；CMI+EA組大鼠Cx43深棕色顆粒多于CMI+PC6組，分布與CMI+PC6組相似。與Control組比較，CMI組大鼠心肌Cx43的平均光密度值明顯降低（P<

14、0.05）；與CMI組大鼠比較，CMI+PC6、CMI+EA組Cx43平均光密度值均明顯升高（P<0.05）。
　　結(jié)論
　　1.對ST段電壓及氧化應(yīng)激的影響：電針能夠通過降低心肌缺血模型大鼠ST段電壓，心功能LVEDD、LVESD值，提高LVEF值，改善心臟功能；也能夠通過調(diào)節(jié)MDA含量，提高SOD活力，減少脂質(zhì)過氧化物的堆積，起到抗自由基損傷的作用，且標(biāo)本配穴電針比電針單穴內(nèi)關(guān)具有更好的效應(yīng)。
　　2.對血管重構(gòu)的