HIV-1感染者抗p24和gp41體液免疫應答的特征及流行病學意義.pdf

1、研究背景:
　　人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)是導致獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)的病原體。HIV-1的跨膜糖蛋白gp41在HIV-1眾多蛋白中最為保守，能誘導產生多個中和抗體，是免疫檢測試劑盒中最為常見的檢測抗原及疫苗研發(fā)的目標。衣殼蛋白p24在病毒蛋白中含量最為豐富，其氨基酸序列在多種亞型中高度保守，也

2、是感染后最早能檢測到的抗原，使其也成為重要的生物標志物。
　　研究發(fā)現(xiàn)在HIV-1感染者體內存在體液免疫應答模式的轉變，提示p24和gp41的免疫優(yōu)勢表位或能成為區(qū)分不同感染模式的生物標志物，對建立實驗室檢測方法有利用價值。
　　研究目的:
　　本課題通過重組表達的p24、gp41蛋白，合成p24、gp41的系列肽段作為包被抗原，探究與HIV-1感染人群外周血與病毒蛋白或肽段的免疫反應特征，探討HIV-1感染者的體液免

3、疫應答模式及其特點，分析HIV-1感染者體液免疫應答模式與感染者病程進展指標的關聯(lián)，發(fā)現(xiàn)有使用價值的特殊生物標志物，建立能區(qū)分不同感染時期的實驗室檢測方法。
　　研究方法:
　　構建p24的重組表達質粒，轉化至大腸桿菌感受態(tài)細菌。經過誘導表達可溶性重組蛋白并對重組蛋白進行純化。表達產物用SDS-PAGE電泳和間接ELISA分析鑒定其活性。
　　收集不同人群來源的HIV-1陽性血漿樣本，利用商品化試劑盒將樣本區(qū)分為近期感

4、染和長期感染，觀察不同人群在感染時期分布上的差異。分別合成3條覆蓋p24和gp41不同區(qū)域的肽段。分析不同人群，不同感染時期的樣本與重組蛋白及肽段的免疫反應特點。
　　分析不同感染時期的樣本與肽段的免疫應答情況，篩選出具有區(qū)分HIV-1不同感染時期能力的肽段。優(yōu)化反應條件，初步建立區(qū)分HIV-1不同感染時期的實驗室檢測方法。通過與兩種商品化試劑盒鑒定結果的比較，評價方法的敏感性和特異性。
　　研究結果:
　　成功構建p

5、24的原核表達質粒并誘導表達，蛋白電泳與預期相符，間接ELISA分析顯示p24具有抗原特異性。
　　88.3％(233/264)的樣本不與三個覆蓋p24主要免疫優(yōu)勢表位的三個肽段反應，與此形成對比的是，87.7％(236/269)的樣本至少與一個gp41的肽段反應。隨著感染時間的延長，HIV-1感染者體內gp41-p1特異性抗體滴度逐步上升，感染時間與gp41-p1的酶免實驗OD值之間的相關系數為0.78。
　　將gp41和