補腎強督治僂方對強直性脊柱炎動物模型IL-23-Th17軸的影響.pdf

1、目的:
　　本文觀察補腎強督治僂方對強直性脊柱炎動物模型免疫炎癥的作用，以及對IL-23/Th17軸的影響。
　　方法:
　　選擇使用BALB/c小鼠于第0天、第20天、第40天尾部皮下注射牛軟骨來源蛋白聚糖構建蛋白聚糖誘導小鼠關節(jié)炎模型(PGIA)，作為研究的強直性脊柱炎動物模型。在此基礎上設置對照組、模型組、補腎強督治僂方組和塞來昔布組，每組10只?？瞻捉M為正常BALB/c小鼠，其余各組經過PGIA造模操作。在第6

2、1-90天，空白組、模型組小鼠給予生理鹽水灌胃，補腎強督治僂方組小鼠給予臨床等效劑量的補腎強督治僂方水提液灌胃，塞來昔布組小鼠給予臨床等效劑量的塞來昔布溶液灌胃，每天一次。實驗結束后處理小鼠，行各項實驗指標觀察。主要實驗指標包括:用國際動物關節(jié)炎評分量表進行小鼠后爪關節(jié)腫脹評分;小動物活體成像儀對小鼠脊椎關節(jié)、爪關節(jié)腫脹情況進行觀察;進行脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)(TI)測量;提取脾臟總淋巴細胞，CCK-8法測量細胞增殖影響，用流式細胞術分析T

3、h17細胞比例;采集血清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測量TNF-α、白介素IL-17、IL-23表達水平;提取腸壁組織總蛋白，并且ELISA法測量回腸IL-17、IL-23組織蛋白表達水平;用HE染色法、番紅-固綠O染色對骶髂關節(jié)或腰椎、尾椎關節(jié)進行組織病理學觀察，免疫組織化學染色法觀察骨干內IL-17、IL-23的表達情況。
　　成果:
　　1、相對于對照組，BALB/c小鼠經商品化牛蛋白聚糖反復免疫后，自發(fā)出現(xiàn)后爪

4、關節(jié)腫脹，關節(jié)炎評分顯著增加(P＜0.001);SI、TI指數(shù)顯著上升(P＜0.05);血清TNF-α表達水平顯著升高（P＜0.001）;血清IL-17表達水平顯著升高（P＜0.001）;IL-23表達水平較對照組顯著升高(P＜0.001);脾臟總淋巴細胞體外培養(yǎng)24小時后，活力較對照組顯著下降(P＜0.001); Th17細胞占總淋巴細胞比例升高;腸壁IL-17、IL-23蛋白表達水平與對照組相比無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;組織病理

5、學染色顯示PGIA小鼠骶髂關節(jié)軟骨化生增多，骶髂關節(jié)逐漸融合，椎間盤炎癥細胞浸潤、纖維環(huán)結構破壞和血管生成，尾椎關節(jié)破壞，證明PGIA小鼠模型構建成功。PGIA小鼠骨干內IL-17陽性細胞鼠較對照組顯著增加(P＜0.001)，IL-23同樣顯著表達(P＜0.01)。
　　2、相對于模型組，補腎強督治僂方組關節(jié)腫脹評分明顯降低（P＜0.05）;SI、TI指數(shù)均有所降低;補腎強督治僂方水提液干預體外培養(yǎng)24小時后，對總淋巴細胞的活力較

6、干預前顯著增加（P＜0.01），說明補腎強督治僂方水提液對PGIA小鼠脾臟總淋巴細胞有促進增殖作用;補腎強督治僂方組小鼠血清TNF-α表達水平較模型組顯著下降(P＜0.01); Th17細胞占總淋巴細胞比例較模型組無統(tǒng)計學意義;腸壁IL-17、IL-23蛋白表達水平與模型組相比無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;HE染色發(fā)現(xiàn)補腎強督治僂方組關節(jié)骨質破壞情況較模型組有所改善，關節(jié)面邊緣較為整齊;同時椎間盤組織較為完整，少見淋巴細胞分布。番紅-固

7、綠染色發(fā)現(xiàn)補腎強督治僂方組骶髂關節(jié)較完整，椎間盤軟骨破壞改善，尾椎融合現(xiàn)象減輕。補腎強督治僂方組骨干內IL-17陽性細胞鼠較對照組顯著增加（P＜0.001），IL-23同樣顯著表達（P＜0.01），但表達與模型組相比均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3、相對于模型組，塞來昔布組關節(jié)腫脹評分有所降低，SI、TI指數(shù)有所降低;塞來昔布溶液干預體外培養(yǎng)24小時后，對總淋巴細胞的活力較模型組顯著增加(P＜0.01)，說明塞來昔布溶液對

8、PGIA小鼠脾臟總淋巴細胞有促進增殖作用;塞來昔布組小鼠血清TNF-α表達水平較模型組有所下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;Th17細胞占總淋巴細胞比例較模型組無統(tǒng)計學意義;腸壁IL-17、IL-23蛋白表達水平與模型組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);HE染色發(fā)現(xiàn)塞來昔布組較模型組骶髂關節(jié)受累情況有所改善，但仍有輕微關節(jié)軟骨細胞增生，椎間盤結構輕微破壞。番紅-固綠染色發(fā)現(xiàn)塞來昔布組骶髂關節(jié)較完整，軟骨細胞和少許血管生成。塞來昔

9、布組小鼠骨干內IL-17陽性細胞鼠較對照組顯著增加(P＜0.001)，IL-23同樣顯著表達(P＜0.05)，但表達與模型組相比均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4、塞來昔布作為本研究中的陽性對照藥，在降低關節(jié)腫脹評分、SI、TI，增加總淋巴細胞活力等方面，與補腎強督治僂方干預結果相似。補腎強督治僂方組在改善體內炎癥，維持骶髂關節(jié)、椎間盤結構完整性方面稍微優(yōu)于塞來昔布組;但在對骨干內IL-23、IL-17的調控作用上，塞來昔布

10、有更好的下調趨勢，不過二者與模型組相比均無統(tǒng)計學差異。
　　結論:
　　1、本研究證明PGIA小鼠模型構建成功，PGIA小鼠體內存在IL-23/Th17軸的失衡，可用于AS發(fā)病機制和靶向IL-23/Th17軸藥物篩選的研究。
　　2、本文數(shù)據(jù)表明，補腎強督治僂方干預可以改善PGIA小鼠炎癥，改善骶髂關節(jié)和軟骨破壞，說明補腎強督治僂方干預對PGIA小鼠模型具有確切的效果。
　　3、補腎強督治僂方對PGIA模型體內改