檢測五種小分子化學物質的蛋白芯片技術研究.pdf

1、免疫芯片是蛋白芯片的一種，芯片上的探針點陣，通過特異性免疫反應捕獲樣品中的靶蛋白，然后通過激光掃描系統(tǒng)和軟件進行圖像掃描、分析、結果定性定量檢測，該技術具有高通量、自動化、靈敏度高等優(yōu)點。 本論文是以小分子污染物為檢測對象，開展免疫芯片技術研究，由于小分子多數(shù)不具備兩個以上供抗體結合的位點，不適用雙抗體夾心法測定，因此，對五種小分子的檢測均采用競爭法。即將小分子先與蛋白質偶聯(lián)，然后通過Cy3對蛋白的標記而間接標記小分子，檢測時

2、，利用非標記小分子對標準液中偶聯(lián)物產生競爭強度確定待測物質的含量。 該研究成功地將壬基酚、阿特拉津、雌二醇、罌粟堿和氯霉素等五種小分子物質與卵清蛋白或牛血清白蛋白進行偶聯(lián)，偶聯(lián)物經標記后均能與各自的抗體結合，同時以水為樣品進行了定性定量檢測。以阿特拉津為代表物，對抗體芯片的制備進行了條件優(yōu)化，結果表明，當抗體濃度達到0.254mg/mL、封閉液選擇2％OVA或3％BSA、反應溫度37℃、樣品稀釋液pH 7.2、抗原抗體反應時間