蛋白芯片技術(shù)對(duì)吸毒人群HCV感染狀況的研究.pdf

1、丙型病毒性肝炎是病毒性肝炎中一種重要的類型，在我國約3.2％的人口受到丙型肝炎病毒(hepatitisvirusC，HCV)感染，西方發(fā)達(dá)國家的感染率也高達(dá)0.5％到2％，全球感染率約3％(1.7億)。感染HCV后50％到85％的患者會(huì)慢性化，大多數(shù)表現(xiàn)為慢性肝炎，估計(jì)約15—20％可進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌，其危害性大。 目前檢測(cè)丙肝病毒的方法有兩類：一是檢測(cè)HCV抗體，二是檢測(cè)HCVRNA。由于檢測(cè)RNA的實(shí)驗(yàn)室條件

2、要求比較高，操作復(fù)雜，易產(chǎn)生假陽性反應(yīng)，并且價(jià)格昂貴、對(duì)實(shí)驗(yàn)人員要求高等原因，限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。現(xiàn)在普遍使用的仍為檢測(cè)HCV抗體的方法，其中以檢測(cè)血清中HCV抗體的ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)法較為普遍，ELISA法主要的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)快速，但仍有不足之處，在感染后窗口期內(nèi)不能測(cè)出，在低危人群中仍發(fā)現(xiàn)大量的不確定及假陽性結(jié)果。 蛋白質(zhì)芯片是伴隨著基因芯片

3、發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)，已開始應(yīng)用于多個(gè)方面，如蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用，蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位，蛋白質(zhì)的功能等.蛋白質(zhì)芯片已成功地應(yīng)用于多種細(xì)胞因子、自身免疫性疾病、及過敏原等的檢測(cè)。近年來也有學(xué)者開始應(yīng)用蛋白芯片進(jìn)行病原微生物的檢測(cè)。 丙型肝炎主要通過輸血、不潔注射等血液傳播以及體液傳播。近年來，隨著對(duì)丙型肝炎病毒抗體和核酸檢測(cè)的開展和普及以及加強(qiáng)對(duì)血源和輸血的嚴(yán)格管理，輸血后丙型肝炎已經(jīng)大幅度減少，靜脈吸毒等不潔注射行為已經(jīng)成為

4、目前我國丙型病毒性肝炎最主要的傳播途徑。在靜脈吸毒人群(Intravenousdrugusers，IVDUs)中有較高的HCV感染率，國外報(bào)道在IVDUs中HCV感染率為30-95％。目前靜脈吸毒人群中HCV感染者的研究主要集中在感染率、危險(xiǎn)因素、吸毒時(shí)間等方面，而在不同的注射方式的靜脈吸毒者中其血清HCVRNA隨吸毒時(shí)間的變化未見有報(bào)道。 本課題對(duì)靜脈吸毒人員及門診非靜脈吸毒人員感染HCV者進(jìn)行研究，應(yīng)用丙肝病毒分片段蛋白質(zhì)芯

5、片、ELISA及熒光定量RT-PCR三種不同方法檢測(cè)靜脈吸毒人員中HCV的抗體及RNA狀況，并與非靜脈吸毒HCV感染者進(jìn)行比較，探討三種檢測(cè)方法檢測(cè)HCV的差異及蛋白芯片技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值，注射方式對(duì)HCVRNA的影響以及靜脈吸毒及非吸毒兩種人群HCV感染者中HCV病原學(xué)差異。 研究對(duì)象：2005年1月在廣東省某強(qiáng)制戒毒所的靜脈吸毒人員89例，其中男性82例，女性7例，平均年齡30歲(20歲～47歲)，使用毒品期限平均2年(10

6、天～12年)。非吸毒HCV感染者為在我院就診的患者35例，其中男性29例，女性6例，平均年齡44歲(29歲～66歲)，均有輸血、血漿史，無吸毒史。 結(jié)果1三種不同檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果：顯示在總共124份血清中，ELISA檢測(cè)HCV抗體陽性114例，RT-PCR檢測(cè)HCVRNA陽性76例，而應(yīng)用丙肝病毒分片段抗體檢測(cè)蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)陽性110例，陰性9例；不確定5例。(抗-C陽性2例，抗-NS3陽性2例，

7、抗一NS4陽性1例)。 2蛋白芯片與HCVRNA檢測(cè)結(jié)果比較76份HCVRNA陽性血清中，蛋白芯片檢測(cè)陽性74份，陰性1份，不確定1份。在48份HCVRNA陰性的血清中蛋白芯片檢測(cè)陽性36份，陰性8份，不確定4份。蛋白芯片與RT-PCR相比陽性符合率為97.37％。在蛋白芯片檢測(cè)陰性的9份血清中，HCVRNA陽性1份，符合率為88.89％，在5份蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果不能確定的血清中，HCVRNA陽性1份。 檢測(cè)結(jié)果中以抗-C

8、+抗-NS3+抗-NS4+抗-NS5陽性組合的比例最高，為71.82％，而且在這種陽性組合中，其HCVRNA陽性率最高，為77.22％，與其他組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=17.348，P=0.004)。 3蛋白芯片檢測(cè)與HCVRNA定量的關(guān)系蛋白芯片檢測(cè)各片段抗體陽性率與HCVRNA血清載量有相關(guān)性，檢測(cè)出的片段抗體陽性數(shù)高，則血清HCVRNA載量高，以C、NS3、NS4、NS5四個(gè)片段抗體同為陽性時(shí)血清HCVRNA載量最高。

9、 4蛋白芯片檢測(cè)與抗-HCV檢測(cè)結(jié)果比較114份抗-HCV陽性血清中，蛋白芯片檢測(cè)陽性109份，陰性1份，不確定4份。在10份抗-HCV陰性的血清中蛋白芯片檢測(cè)陽性1份，陰性8份，不確定1份。蛋白芯片與抗-HCV相比陽性符合率為95.62％?？?HCV陰性的10份血清中，蛋白芯片檢測(cè)陽性1份，符合率為90％，在5份蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果不能確定的血清中，抗-HCV陽性4份。比較顯示蛋白芯片檢測(cè)特異性高于抗-HCV檢測(cè)。 5IVDU

10、s和nIVDUsHCV感染者丙型肝炎分片段蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果比較在兩組HCV感染者中，應(yīng)用分片段蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果表明各個(gè)片段抗體在兩組中分布無明顯差異(χ2=7.048，P=0.531)，都以抗-C+抗-NS3+抗-NS4+抗-NS5抗體陽性組合陽性率最高。 6靜脈吸毒人員中HCV感染狀況和檢測(cè)結(jié)果分別應(yīng)用丙肝病毒分片段抗體檢測(cè)蛋白質(zhì)芯片、ELISA及熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：在靜脈吸毒人員中抗-HCV陽性79例(88.7

11、6％)，HCV-RNA陽性58(65.17％)，而應(yīng)用丙肝病毒分片段抗體檢測(cè)蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)結(jié)果示：陽性77例，陰性9例，不確定3例。(抗-C陽性1例，抗-NS3陽性1，抗-NS4陽性1例)。 7共用注射器吸毒人員中吸毒時(shí)間與HCVRNA的關(guān)系在共用注射器吸毒的不同吸毒年限吸毒人員中，雖然以吸毒時(shí)間3-6年組及大于9年組陽性率最高，為100％，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯示各組陽性率無顯著性差異(χ2=4.711，P=0.194)。 8

12、無共用注射器吸毒人員中吸毒時(shí)間與HCVRNA的關(guān)系在無共用注射器吸毒的不同吸毒年限吸毒人員中，以吸毒時(shí)間小于3年組陽性率最高，為69.44％(25/36)，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯示各組陽性率有顯著性差異，吸毒時(shí)間越長則HCVRNA陽性率降低(χ2=8.695，P=0.034)。 9共用注射器吸毒人員中吸毒時(shí)間與HCVRNA血清定量的關(guān)系在共用注射器的不同吸毒年限吸毒人員中，雖然以吸毒時(shí)間大于9年組血清HCVRNA載量最高，達(dá)到1*104.

13、8382copy/ml，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯示各組陽性率無顯著性差異(F=1.600，P=0.203)。 10無共用注射器吸毒人員中吸毒時(shí)間與HCVRNA血清定量的關(guān)系在無共用注射器的不同吸毒年限靜脈吸毒人員中，雖然以吸毒時(shí)間大于9年組血清HCVRNA載量最高，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯示各組陽性率無顯著性差異(F=2.778，P=0.053)。 11無共用注射器吸毒人員中吸毒時(shí)間與抗-HCV關(guān)系在無共用注射器吸毒的不同吸毒年限吸毒人員中

14、，以吸毒時(shí)間小于3年組陽性率最高，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯示各組陽性率無顯著性差異(χ2=3.056，P=0.383)。 12非吸毒HCV感染者的檢測(cè)結(jié)果：結(jié)果顯示在35例門診非吸毒HCV感染者中，抗-HCV陽性為35例，其中18例檢測(cè)HCVRNA陽性，而應(yīng)用丙肝病毒分片段抗體檢測(cè)蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)結(jié)果顯示陽性33例，不確定2例。(抗-C陽性1例，抗-NS3陽性1例)。 13兩組人員HCV感染者HCVRNA檢測(cè)結(jié)果比較：靜脈吸毒人員中H

15、CV感染者中HCVRNA陽性率為73.417％(58/79)，高于門診非吸毒HCV感染者中其陽性率為51.429％(18/35)，(χ2=5.277，P=0.022)。 而靜脈吸毒人員中HCV感染者血清HCVRNA載量為1×103.10(copies/ml)，較門診非吸毒HCV感染者血清HCVRNA載量(1×102.26(copies/ml))高，(t=1.986，P=0.049)。 結(jié)論1丙肝病毒分片段抗體檢測(cè)蛋白質(zhì)芯

16、片檢測(cè)其特異性高于ELISA法檢測(cè)抗-HCV，其敏感性高于HCVRNA檢測(cè)。 2丙肝病毒分片段抗體檢測(cè)蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)中，以抗-C(+)、抗-NS3(+)、抗-NS4(+)、抗-NS5(+)組合的陽性率最高。片段抗體數(shù)與血清HCVRNA呈正相關(guān)。 3靜脈吸毒者中HCV感染率高，短時(shí)間吸毒仍有較高感染率。 4靜脈吸毒人員共用注射器者血清HCVRNA與吸毒時(shí)間無相關(guān)性。無共用注射器者中吸毒時(shí)間短者血清HCVRNA陽性率