SELDI蛋白芯片技術(shù)在篩選中草藥靶點(diǎn)中的應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)組學(xué)是21 世紀(jì)整體細(xì)胞生物學(xué)新的、最重要的內(nèi)容，將為醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和工業(yè)的革新提供嶄新的思路。蛋白質(zhì)組相關(guān)的課題成為近年來醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)領(lǐng)域非?；钴S的研究方向。在對(duì)人類蛋白質(zhì)組的研究方面，當(dāng)前主要圍繞于特異的組織、細(xì)胞和疾病上，通過比較研究體系內(nèi)不同狀態(tài)(如不同生長發(fā)育時(shí)期、給藥前后、生理與病理狀態(tài))的蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜，定量分析各蛋白質(zhì)的變化，從而可以對(duì)不同體系(組織、細(xì)胞、體液等)內(nèi)復(fù)雜代謝、調(diào)控等生物功能進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。以蛋白質(zhì)組為

2、研究手段，分析疾病與治療之間的定量關(guān)系，正在成為臨床診斷與治療的新的發(fā)展方向。 蛋白質(zhì)組學(xué)作為高通量平行篩選技術(shù)在理論體系上與中醫(yī)藥的整體觀、辨證觀、動(dòng)態(tài)觀非常相似，尤其是作為某一階段病理變化概況的中醫(yī)的“證”，可能與機(jī)體在某一特定環(huán)境下所表達(dá)的蛋白質(zhì)組存在內(nèi)在必然聯(lián)系。把中醫(yī)的證當(dāng)作疾病一定階段某一特定狀態(tài)下表達(dá)的蛋白質(zhì)組功能的總和并沒有牽強(qiáng)附會(huì)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“證”包括了疾病處于某一階段病因、病性、病位、病勢(shì)等病理要素，是機(jī)體內(nèi)

3、外因素綜合作用的反應(yīng)，隨著疾病的病程不同而相應(yīng)發(fā)生變化。同一疾病證候不一，可以認(rèn)為同一疾病不同階段或在不同個(gè)體身上的功能基因組的表達(dá)譜——功能蛋白質(zhì)組不一樣，證候產(chǎn)生的物質(zhì)基礎(chǔ)可能就反映在蛋白質(zhì)組水平上。因?yàn)榧膊”憩F(xiàn)出來的癥狀和體征具有其分子基礎(chǔ)，這些表現(xiàn)型的實(shí)質(zhì)是功能基因組及其在mRNA、功能蛋白質(zhì)組水平差異的外在表現(xiàn)，故“證”的本質(zhì)可以認(rèn)為是疾病個(gè)體基因型及其表達(dá)結(jié)果一蛋白質(zhì)組。通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，比較復(fù)方、各種組合的拆方作用后蛋白

4、質(zhì)表達(dá)的差異，進(jìn)而確定不同配伍對(duì)應(yīng)的基因靶點(diǎn)與功能蛋白質(zhì)。這不但有利于闡明方藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及處方配伍的內(nèi)在規(guī)律，而且還可以在治療層面上反過來再認(rèn)識(shí)“證”的實(shí)質(zhì)。 SELDI 技術(shù)經(jīng)美國賽弗吉生物系統(tǒng)公司(Ciphergfen Biosystems，Inc，F(xiàn)remont，CA，USA) 研發(fā)和商品化而形成SELDI-TOF-MS，亦常稱作蛋白質(zhì)指紋技術(shù)或飛行質(zhì)譜技術(shù)。SELDI-TOF-MS 為最近幾年發(fā)展起來的一種新的蛋白質(zhì)

5、組研究方法，其以基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 (matrix-assisted laser desorption ionization time offlight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS) 為基礎(chǔ)并進(jìn)行改進(jìn)，融合了質(zhì)譜和芯片兩大技術(shù)的特色和優(yōu)勢(shì)。蛋白質(zhì)芯片技術(shù)結(jié)合蛋白組學(xué)用于腫瘤研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一系列新的腫瘤特異性生物標(biāo)志物，包括前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、胃腸道腫瘤等，同時(shí)在腫瘤的發(fā)病機(jī)制方面也

6、取得了一些新的進(jìn)展。另中藥進(jìn)入人體發(fā)揮作用的最終環(huán)節(jié)大多是藥物分子與蛋白質(zhì)的反應(yīng)。通過對(duì)蛋白質(zhì)組的研究尋找不良相關(guān)蛋白；研究藥靶、分子藥理、毒理機(jī)制。SELDI-TOF-MS 能靈敏的檢測(cè)到中藥用藥前后機(jī)體蛋白質(zhì)組表達(dá)的變化，從而能快速發(fā)現(xiàn)對(duì)藥物敏感的機(jī)體蛋白或發(fā)現(xiàn)新的藥靶分子。該實(shí)驗(yàn)以中草藥魚腥草注射液為例，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(狗)為研究對(duì)象結(jié)果表明：注射魚腥草的狗(留取給藥 1-9 天的血清)與注射NS的狗(均留取給藥1-7天的血清)相比，檢