2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、(一)免提取cfDNA含量及完整性檢測(cè)方法建立及性能評(píng)價(jià)
  背景
  非小細(xì)胞肺癌是肺癌中最常見(jiàn)的類(lèi)型,包括腺癌,鱗癌,細(xì)支氣管肺泡癌和大細(xì)胞癌。大約70%的患者在確診時(shí),已是晚期或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,不能得到很好的治療,所以盡早發(fā)現(xiàn)非常重要。腫瘤患者血液中的游離DNA(cell free DNA,cfDNA)包括循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA),主要來(lái)源于細(xì)胞的凋亡和壞死。血液循環(huán)中的癌細(xì)胞

2、和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞同樣釋放cfDNA,可以通過(guò)檢測(cè)cfDNA含量來(lái)估算腫瘤負(fù)荷、評(píng)價(jià)治療效果。DNA的完整性(Integrity)有別于非腫瘤人群是腫瘤患者cfDNA的另一個(gè)顯著特征。目前定量常用PCR方法,第一步需要提取血液循環(huán)DNA,這是一個(gè)極容易產(chǎn)生誤差的步驟。即便不考慮操作者的因素,提取方法和試劑的不同就會(huì)造成巨大誤差。
  目的
  研究一種方法,不經(jīng)過(guò)DNA提取步驟,直接對(duì)血液中的循環(huán)DNA進(jìn)行定量,可以去除DN

3、A提取試劑盒和操作人員差異造成的DNA提取誤差。
  方法
  通過(guò)提取和免提取cfDNA直接定量的兩種方法來(lái)對(duì)比檢測(cè)cfDNA,比較兩者的擴(kuò)增效率,精密度及準(zhǔn)確度。
  結(jié)果
  我們通過(guò)特殊的技術(shù)工藝處理,可以直接用血清進(jìn)行定量PCR,不影響PCR反應(yīng),擴(kuò)增效率與提純DNA一致,可精確檢測(cè)出低至ng水平的血清游離DNA,檢測(cè)范圍1-10000ng/ml,本方法具有較高的準(zhǔn)確度及精密度。相比先用試劑盒提取cfD

4、NA,在定量結(jié)果的穩(wěn)定性、重復(fù)性等方面都有顯著改善。
 ?。ǘ┓切〖?xì)胞肺癌患者cfDNA含量及完整性的研究
  背景
  近年來(lái),血液循環(huán)DNA(cfDNA)作為一種潛在的腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)受到越來(lái)越多人的關(guān)注,因?yàn)樗臋z測(cè)創(chuàng)傷很小而且方便,所以比較容易被人們接受。cfDNA的水平在健康人和良性疾病病人中較低,但是在非小細(xì)胞肺癌患者的血液中有非常明顯的增加。癌癥病人的循環(huán)腫瘤DNA的完整性也是其重要特征之一。因此聯(lián)合cf

5、DNA的含量和完整性可能是診斷癌癥的一個(gè)很好的指標(biāo)。
  目的
  通過(guò)比較非小細(xì)胞肺癌患者和健康人的循環(huán)DNA的含量及完整性,來(lái)評(píng)價(jià)循環(huán)DNA含量及完整性用于診斷NSCLC的臨床價(jià)值。
  方法
  采用本實(shí)驗(yàn)室創(chuàng)立的免提取血液循環(huán)DNA含量及完整性檢測(cè)的PCR技術(shù),對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者及健康人的循環(huán)DNA進(jìn)行定量,分析比較兩組的區(qū)別。
  結(jié)果
  1. NSCLC病人組及健康對(duì)照組的cfDNA含量

6、中位數(shù)(四分位距)分別為212(622.25) ng/ml和65.4(290.65) ng/ml,二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05;而完整性指數(shù)(DII)的中位數(shù)(四分位距)分別是0.0764(0.276)和0.066(0.186),兩組之間的差異無(wú)顯著性,P>0.05。
  2. cfDNA含量和完整性指數(shù)(DII)在不同性別、年齡及腫瘤病理類(lèi)型間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P值均大于0.05;而在不同病理分期的組間差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義,P<0.05。
  3.循環(huán)DNA含量用來(lái)區(qū)分NSCLC患者和健康人群的AUC是0.659,此時(shí)的敏感性為72.3%,特異性為59.5%,cut-off值為87.5 ng/ml。
 ?。ㄈ┓切〖?xì)胞肺癌組織EGFR信號(hào)途徑相關(guān)基因突變的檢測(cè)
  背景
  目前,與NSCLC靶向治療相關(guān)幾個(gè)信號(hào)途徑已經(jīng)被研究多年,其中最主要的是表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor

8、,EGFR)信號(hào)途徑,針對(duì)該途徑研制開(kāi)發(fā)的酪氨酸酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitor,TKI),常用的藥物有厄洛替尼,吉非替尼,西妥昔單抗等,都在臨床上取得了不錯(cuò)的療效。EGFR信號(hào)通路中,EGFR、KRAS、PIK3等基因是否存在缺失、重排或點(diǎn)突變,都可以顯著影響上述靶向藥物療效。所以,臨床上在應(yīng)用靶向藥物之前,常規(guī)都會(huì)進(jìn)行相關(guān)靶點(diǎn)基因的檢測(cè)。
  目的
  對(duì)臨床上非小細(xì)胞肺癌患者經(jīng)常發(fā)生的EGF

9、R信號(hào)途徑相關(guān)基因突變進(jìn)行檢測(cè),分析患者的突變情況與臨床因素之間的聯(lián)系。
  方法
  采集手術(shù)時(shí)NSCLC患者新鮮腫瘤組織,提取基因組DNA,經(jīng)過(guò)特異性引物擴(kuò)增后,用焦磷酸測(cè)序檢測(cè)待測(cè)突變。
  結(jié)果
  1.56名患者腫瘤組織中,共有9名檢出EGFR19外顯子缺失突變,8名檢出21外顯子L858R堿基替換,1名檢出18外顯子G719S/C突變;還有2名檢出KRAS第12密碼子突變,1名檢出PIK3CA的E54

10、5K點(diǎn)突變。綜合看來(lái),EGFR的突變率為32.14%, KRAS的突變率為3.57%,PIK3CA突變率為1.79%。
  2. NSCLC患者腫瘤組織的EGFR的突變率在不同病理分期、病理類(lèi)型之間有顯著性差異,P<0.05。
  結(jié)論
  1.免提取cfDNA定量PCR方法,具有較高的準(zhǔn)確度及精密度,線(xiàn)性范圍能夠達(dá)到1-10000ng/ml,與試劑盒提取法相比,在定量結(jié)果穩(wěn)定性、重復(fù)性等方面都有顯著改善。
  

11、2.基于LINE1基因的免提取定量PCR方法,能夠很好地對(duì)NSCLC病人的血液循環(huán)DNA含量及完整性進(jìn)行測(cè)定。
  3.非小細(xì)胞肺癌患者循環(huán)DNA含量顯著高于健康人;NSCLC病人cfDNA含量、完整性指數(shù)(DII)與患者的病理分期相關(guān),分期越早,含量及完整性越低,提示檢測(cè)此標(biāo)志物水平有助于評(píng)估疾病的嚴(yán)重程度;cfDNA含量用于診斷NSCLC的靈敏度是72.3%,特異度是59.5%,cut-off值為87.5 ng/ml,此時(shí)RO

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