新型金屬螯合親和反膠團對EGFP萃取特性的研究.pdf

1、反膠團萃取技術(shù)廣泛應(yīng)用在蛋白質(zhì)等生物活性物質(zhì)的分離過程中，但是傳統(tǒng)的離子型反膠團在萃取過程中往往對蛋白質(zhì)選擇性低以及使蛋白質(zhì)失活?；诖耍狙芯渴仪叭碎_發(fā)出了新型的金屬螯合親和反膠團(MCARM)，為了驗證此反膠團對實際表達蛋白的萃取分離能力，本文利用MCARM對基因工程表達產(chǎn)物6×his標記的增強型綠色熒光蛋白(EGFP)的萃取特性進行了系統(tǒng)的分析。
　　 首先，本文研究了MCARM對純化好的EGFP的萃取以及反萃特性。研究內(nèi)

2、容包括EGFP的萃取及反萃動力學；金屬離子濃度、pH、鹽濃度對EGFP萃取率的影響；咪唑濃度、pH和鹽濃度對EGFP反萃率的影響。結(jié)果表明，MCARM萃取EGFP的平衡時間為6 min，反萃平衡時間為120 min。當鎳離子濃度為2mmol/L，萃取的操作pH為7～9，鹽濃度為0.1 mol/L時，可將濃度為0.5 mg/mL的EGFP的萃取率達到90％以上。當反萃液中咪唑濃度為500 mmol/L，pH在8～10之間，鹽濃度為0.1

3、mol/L時，EGFP的反萃率達到90％以上，所得產(chǎn)物具有熒光活性。驗證了MCARM對EGFP具有高萃取率和高反萃率。
　　 在上述工作基礎(chǔ)上，本文進一步利用該反膠團直接從表達菌的破菌上清液中純化可溶表達的EGFP。從上樣蛋白質(zhì)濃度、反膠團中鎳離子濃度以及萃取次數(shù)等方面對EGFP的純化條件進行了優(yōu)化，并最終與金屬螯合色譜進行了比較。結(jié)果表明，料液蛋白濃度為0.6 mg/mL，上樣量為4 mL，反膠團中鎳離子濃度為3mmol/L時