色素親和反膠團(tuán)輔助溶菌酶復(fù)性的研究.pdf

1、反膠團(tuán)復(fù)性法是目前國(guó)內(nèi)外最為新穎的蛋白質(zhì)復(fù)性方法之一,可見報(bào)道有限,其中除一篇使用的是非離子型反膠團(tuán)外,其余幾篇使用的都是離子型反膠團(tuán),且均未修飾親和配基.本文利用新型的反膠團(tuán)一色素親和反膠團(tuán)輔助溶菌酶復(fù)性,色素親和反膠團(tuán)是一種修飾了親和配基的非離子型反膠團(tuán),是由親和配基一活性色素辛巴藍(lán)(CB)、非離子型表面活性劑一失水山梨醇三油酸酯(Span 85)、有機(jī)溶劑正己烷(n-hexane)等在一定條件下反應(yīng)得到的. 本文系統(tǒng)研究了

2、CB/Span 85/n-hexane系統(tǒng)輔助溶菌酶復(fù)性的實(shí)驗(yàn)方法以及操作參數(shù)的影響,包括Span 85、CB、脲、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、還原型谷胱甘肽(GSH)、溶菌酶的濃度,pH值,反膠團(tuán)含水率(Wo),反應(yīng)時(shí)間等.成功實(shí)現(xiàn)了較高濃度(3～3.5 mg/mL)溶菌酶的完全復(fù)性,體現(xiàn)出反膠團(tuán)法較直接稀釋法的巨大優(yōu)勢(shì),以及非離子型親和反膠團(tuán)較單純非離子型反膠團(tuán)在復(fù)性效果方面的較大優(yōu)勢(shì)；同時(shí)保證95﹪以上的溶菌酶能夠被0.5 mol

3、/LMgCl<,2>溶液反萃回收,且圓二色光譜分析證明了最終所得溶菌酶二級(jí)結(jié)構(gòu)的正確性,體現(xiàn)出非離子型親和反膠團(tuán)較離子型反膠團(tuán)在蛋白質(zhì)回收方面的較大優(yōu)勢(shì).在此基礎(chǔ)上,嘗試改進(jìn)反膠團(tuán)性能,如添加助溶劑、助表面活性劑等以期進(jìn)一步提高復(fù)性濃度,取得了一定的效果. 在成功實(shí)現(xiàn)CB/Span 85/n-hexane系統(tǒng)輔助溶菌酶復(fù)性基礎(chǔ)上,本文進(jìn)一步將色素親和反膠團(tuán)與人工伴侶,即陽(yáng)離子型表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)與β-環(huán)糊