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1、天津大學(xué)碩士學(xué)位論文添加劑輔助變性溶菌酶復(fù)性的研究姓名:黃艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化工指導(dǎo)教師:董曉燕20030101ABSTRACTTheroleofvariousdilutionadditiviesontherefoldiagofdenaturedreducedchickeneggwhitelysozymeWaSinvestigated,andeffectoftheconcentrationsofadditives、oxidi
2、zedglutathione(GSSG)、reducedglutathione(GSH)andpH,temperaturewasstudiedtofindproperrefoldingconditionsAkineticmodelwasemployedtoexpresstherenaturationprocessofdenaturedlysozymeinthepresenceofadditivesInthesaruetime,Wedis
3、cussedthepossibilityoflysozymerefoldingbyincreasingadditiviesconcentrationsandreducingguanidiniumchloride(GdmCl)concentrationItwasfoundthattherenaturationyieldWasimprovedinthepresenceofarginine,acetamide,acetone,thiourea
4、andglycerol,andtherewasanoptimaladditiveconcentrationforeachadditive,whichmadetherefoldingteachthehighestyieldTheexprementsresultsshowedthattheoptimalpHandtemperaturewere89and37。C,therationofGSSG:GSHWaSl:1andtheoptimalgl
5、utathioneconcentationwas5mm01/LThekineticmodelWaSingoodagreementwiththeexperimentresultsItWItSfoundthattherefoldingpromotingmechanismofacetamide,thioureaacetone,argininewastheSalrleaSthatofGdmClThatis。witllincreasingaddi
6、tivesconcentrations,therenaturationrateconstantsdecreased,butthereexistedspecialadditivesconcentrationsthatminimizedtheaggregationrateconstants,thusleadingtomaximumrecoveryoftherelativeactivityInthecontraSt,therenaturati
7、onrateconstantsincreasedwithincreasingglycerolconcentration1nthepresenceoflowerGdmClconcentrafion(O06mol/L),iftheadditivesconcentrations(acetamide,thiourea,acetone,arginine)intherefoldingbufferwereproperlyincreased,there
8、naturationyieldcouldbethesameasthatinthepresenceofhigherGdmClconcentration(02reel/L)HoweverGlycerolWaSdifferenttootheradditivesThatis,increaSingglyeerolconcentrationataproperGdmClconcentrationcouldobtainahighrefoldingyie
9、ldofprotein,F(xiàn)urthermore,therenaturationrecoverydecreasedwhenthelysozymeconcentrationWaSincreaSed,butifweincreasedacetamideconcentration,thedenaturedlysozymeofO8mg/mlcouldbewellrefolded,andtherenaturationyieldwas90%Keywor
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