添加劑輔助變性碳酸脫水酶復(fù)性的研究.pdf

1、該文研究了不同添加劑對(duì)促進(jìn)變性牛碳酸脫水酶(CAB)的復(fù)性作用.考察了各種因素(添加劑濃度、pH值、溫度和較低鹽酸胍濃度下添加劑濃度)對(duì)復(fù)性收率的影響.并應(yīng)用相關(guān)動(dòng)力學(xué)模型,對(duì)酰胺化合物輔助CAB復(fù)性的動(dòng)力學(xué)過(guò)程進(jìn)行了深入分析,探討了乙酰胺促進(jìn)CAB復(fù)性的機(jī)理,試驗(yàn)了其它酰胺化合物對(duì)CAB復(fù)性的可能性.結(jié)果表明,乙酰胺、脲、硫脲、丙酮、β-CD、CTAB+β-CD和Tween 40+β-CD均能有效促進(jìn)變性CAB復(fù)性.β-CD、CTAB

2、+β-CD和Tween 40+β-CD隨著濃度增大,促進(jìn)作用增強(qiáng);而乙酰胺、脲、硫脲均存在最佳濃度使變性CAB復(fù)性收率最大.乙酰胺、脲、硫脲、丙酮等添加劑不改變復(fù)性液的pH值,均可在較寬的pH范圍(5.5~8.5)內(nèi)促進(jìn)CAB復(fù)性;添加劑的加入改變了CAB復(fù)性收率不隨溫度變化的規(guī)律,脲、乙酰胺在37℃、硫脲在45℃時(shí)復(fù)性收率最大.利用三級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程擬和酰胺化合物輔助CAB復(fù)性的動(dòng)力學(xué)過(guò)程.結(jié)果表明,模型計(jì)算值與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)能較好吻合.酰

3、胺化合物與鹽酸胍類(lèi)似,復(fù)性速率常數(shù)K<,N>值大于沒(méi)有添加劑時(shí)的自發(fā)復(fù)性,但隨添加劑濃度增加而降低,聚集體生成速率常數(shù)K<,A>值則在最佳添加劑濃度下出現(xiàn)最小值,從而使K<,N>/K<,A>值最大,復(fù)性收率r值最大.降低復(fù)性液中鹽酸胍濃度,適當(dāng)提高添加劑濃度,乙酰胺和脲仍可使變性CAB得到同樣的復(fù)性效果;而硫脲必須在一定濃度的鹽酸胍存在下,才能有效促進(jìn)CAB復(fù)性.由于高濃度乙酰胺會(huì)引起蛋白質(zhì)的不可逆變性,因此乙酰胺雖可用做輔助蛋白質(zhì)復(fù)性