鏈霉親和毒的原核表達及復性.pdf

1、SA(streptavidin下稱SA)是Streptomyces avidinii菌培養(yǎng)過程中外分泌的一種蛋白產(chǎn)物，可以高度特異性地結合水溶性的維生素，D-生物素(D-biotin)。SA-biotin系統(tǒng)具有親和力高、特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好、信號放大等優(yōu)點，SA-biotin系統(tǒng)廣泛地運用于醫(yī)學、免疫學、分子生物學及組織化學等相關領域。目前SA主要來源于鏈霉菌屬的傳統(tǒng)發(fā)酵和基因工程菌的外源表達，后者具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、易于

2、純化等優(yōu)點，成為近年來生產(chǎn)研究的熱點。
　　 大腸桿菌表達系統(tǒng)與枯草桿菌表達系統(tǒng)是當前運用最為廣泛的兩種原核表達系統(tǒng)。前者具有過量表達外源蛋白、生產(chǎn)運用廣泛、遺傳及分子生物學背景清晰等優(yōu)點，而后者具有可外分泌表達外源蛋白、安全可靠等優(yōu)點。
　　 本論文運用枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)和大腸桿菌表達系統(tǒng)表達多種形式SA并對表達的蛋白進行復性，目的在于探索獲得高產(chǎn)SA的表達菌株以及SA高效復性方案。
　　 本研究通過PCR擴

3、增成功獲得三種SA的編碼基因：stv-13（編碼16-133位氨基酸殘基）、csa（編碼13-139位氨基酸殘基）、cnsa（編碼13-159位氨基酸殘基）。將sty-13克隆到B.subtilis表達載體pP43和pSacR中，構建B.subtilisWB800（pSacR-stv-13）蔗糖誘導型表達菌、B.subtilis WB800（pP43-stv-13）和B.subtilis168(pP43-stv-13)組成型表達菌株，但

4、均無明顯外分泌表達目的蛋白。將sty-13、csa、cnsa克隆到E.coli表達載體pET22b、pETlla中，構建成表達菌株BL21(DE3)(pET22b-stv-13)、BL21(DE3)(pET22b-csa)、BL21(DE3)(pET11a-cnsa)、BL21(DE3)pLysS(pET22b-stv-13)、BL21(DE3)pLysS(pET22b-csa)、BL21(DE3)pLysS(pET11a-cnsa)、