LiCl對(duì)不同基因型小鼠前脂肪細(xì)胞成脂分化中Chemerin表達(dá)的影響.pdf

1、目前，越來(lái)越多的人患有肥胖癥，其可引發(fā)多種并發(fā)癥，如冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、高血壓、高血脂及腫瘤等疾病，嚴(yán)重威脅著人類健康。因此，研究肥胖的發(fā)生機(jī)制和防治措施已成為21世紀(jì)生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的迫切任務(wù)。
　　白色脂肪組織的過(guò)度積累引發(fā)肥胖，而脂肪細(xì)胞的分化在肥胖發(fā)生過(guò)程中扮演了重要角色，涉及復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)分子調(diào)控。Wnt/β-catenin信號(hào)通路、chemerin/CMKLR1信號(hào)通路及TNF-α均參與脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控過(guò)程。

2、其中，Wnt/β-catenin信號(hào)通路通過(guò)下調(diào)C/EBPs和PPARγ的表達(dá)水平，抑制成脂分化。Chemerin作為新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，通過(guò)自分泌和旁分泌的方式調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化。有研究表明，分別抑制chemerin及其受體CMKLR1的表達(dá)后，可使脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程明顯受阻；同時(shí)，chemerin可降低GSK-3β的磷酸化水平，激活GSK-3β，而后者是影響Wnt/β-catenin信號(hào)通路中β-catenin是否降解的關(guān)鍵因子。由此

3、推測(cè)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路與chemerin信號(hào)分子在調(diào)控成脂分化過(guò)程中存在串話。然而，其串話機(jī)制還未明確，尤其在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)chemerin的表達(dá)有何影響？其影響機(jī)制是什么？目前未見(jiàn)研究報(bào)道。另外，TNF-α作為一種炎癥因子，也通過(guò)多種機(jī)制抑制成脂分化，而它與 Wnt/β-catenin及chemerin/CMKLR1信號(hào)通路之間的關(guān)系還不清楚。
　　本實(shí)驗(yàn)以WT小鼠

4、、TNF-α-/-小鼠、Leprdb/db小鼠及DT小鼠為實(shí)驗(yàn)材料，使用Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活劑LiCl，干預(yù)四種基因型小鼠前脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程，建立Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活模型，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫印跡技術(shù)，檢測(cè)成脂分化中chemerin及成脂相關(guān)因子的表達(dá)變化，并分析TNF-α缺失情況下，對(duì)LiCl引起chemerin表達(dá)變化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.誘導(dǎo)WT小鼠前脂肪細(xì)胞分化，確

5、定成脂分化過(guò)程中四個(gè)關(guān)鍵時(shí)期，即未誘導(dǎo)時(shí)期（誘導(dǎo)前）、誘導(dǎo)早期（誘導(dǎo)3天后）、誘導(dǎo)中期（誘導(dǎo)7天后）及誘導(dǎo)晚期（誘導(dǎo)14天后）。
　　2.形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，20 mM LiCl顯著抑制四種基因型小鼠前脂肪細(xì)胞的分化，且抑制效果無(wú)明顯差異。另外，TNF-α-/-小鼠脂肪細(xì)胞的成脂誘導(dǎo)率最高，約80％，WT小鼠次之，DT小鼠再次之，Leprdb/db小鼠最低，約40%。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明，使用LiCl干預(yù)四種基因

6、型小鼠前脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中，與非干預(yù)組相比，成脂相關(guān)因子C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ2及adiponectin的基因表達(dá)水平均下調(diào)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵分子β-catenin的基因表達(dá)水平上調(diào)，而chemerin的基因表達(dá)水平于分化早期下調(diào)，分化中期和晚期均上調(diào)。另外，TNF-α缺失可上調(diào)成脂分化早期chemerin基因的表達(dá)，并且對(duì)LiCl通過(guò)正反饋調(diào)節(jié)機(jī)制引起的chemerin基因表達(dá)的上調(diào)起促進(jìn)作用。<

7、br>　　4.免疫印跡結(jié)果表明，使用LiCl干預(yù)四種基因型小鼠前脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中，與非干預(yù)組相比，adiponectin蛋白的表達(dá)水平顯著下調(diào)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵分子β-catenin蛋白的表達(dá)水平略上調(diào)，而chemerin蛋白的表達(dá)水平于分化早期下調(diào)，分化中期和晚期均無(wú)明顯變化。
　　上述結(jié)果表明，在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中，Wnt/β-catenin信號(hào)通路主要在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控chemerin的表達(dá)，其調(diào)控作用主