豬前脂肪細(xì)胞分化過程中抵抗素基因表達(dá)水平及其影響因素.pdf

1、目的：
　　 本研究旨在探討抵抗素基因(RETN)在豬前脂肪細(xì)胞分化過程中表達(dá)水平的變化規(guī)律以及胰島素、葡萄糖、地塞米松對(duì)RETN表達(dá)水平的影響。
　　 方法：
　　 1、從1日齡仔豬皮下脂肪組織分離前脂肪細(xì)胞,于37℃、5％CO2、飽和濕度下進(jìn)行原代培養(yǎng),通過MTT法,油紅O染色以及測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂蛋白脂酶活性鑒定豬前脂肪細(xì)胞。
　　 2、用油紅O染色法觀察前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)3、5、7、10d后細(xì)胞形態(tài)的變化,

2、并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)前脂肪細(xì)胞分化過程中RETN基因表達(dá)水平的變化。
　　 3、將增殖的豬前脂肪細(xì)胞隨機(jī)分為3組,分別培養(yǎng)于含有胰島素、葡萄糖和地塞米松的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)液中胰島素終濃度為0,10,100和1000 nmol/L;葡萄糖終濃度為0,5,10和20 mmol/L;地塞米松的終濃度為0,10,100和1000 nmol/L。每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)重復(fù)。接種1d后將培養(yǎng)基更換為測(cè)試培養(yǎng)基即加入影響因子的培養(yǎng)基(記為0d),

3、此后每隔2d換液一次。并于換液后的第3、5、10d后取樣。通過油紅O染色法觀察胰島素、葡萄糖、地塞米松對(duì)前脂肪細(xì)胞分化的影響,并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)胰島素、葡萄糖、地塞米松對(duì)RETN基因表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)至第3d時(shí),細(xì)胞內(nèi)有少量脂滴出現(xiàn),此后細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集,脂滴數(shù)量增加,體積逐漸增大,最后匯集成大脂滴充滿細(xì)胞。低劑量的葡萄糖(5mM)和地塞米松(10nM)對(duì)前脂肪細(xì)胞分化的影響不

4、明顯,胰島素、萄糖和地塞米松都有誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化的作用,隨著影響因子的濃度增大而細(xì)胞分化速度加快,隨培養(yǎng)時(shí)間的增加而分化程度增大。
　　 2、抵抗素在3,5,7,10d的相對(duì)表達(dá)量分別是14.31±1.29,5.58±0.29,2.25±0.08,1.61±0.01,相鄰兩時(shí)間點(diǎn)比較抵抗素的表達(dá)差異均有顯著性意義(P<0.01)。
　　 3、與對(duì)照組相比,胰島素能顯著促進(jìn)RETN的表達(dá),此作用具有劑量依賴性；葡萄糖均能

5、提高RETN的表達(dá),且呈時(shí)間依賴性。
　　 4、地塞米松在低濃度(10nM)的情況下,短時(shí)間(3d)內(nèi)可抑制抵抗素的表達(dá),5天內(nèi)對(duì)抵抗素表達(dá)影響較小,與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；但長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)可誘導(dǎo)抵抗素的表達(dá),而地塞米松為100nM和1000nM時(shí),對(duì)抵抗素表達(dá)的誘導(dǎo)作用呈劑量和時(shí)間依賴性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、在細(xì)胞分化過程中,抵抗素的表達(dá)量顯著下降(p<0.01),提示RETN基因與

6、前脂肪細(xì)胞脂肪代謝調(diào)節(jié)有關(guān),其表達(dá)水平下調(diào)能促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化。
　　 2、胰島素能顯著上調(diào)抵抗素的表達(dá)且呈劑量依賴性(P<0.05),；葡萄糖能誘導(dǎo)抵抗素的表達(dá)并呈時(shí)間依賴性(P<0.05)；低劑量的地塞米松(10nM)在短時(shí)間(3d)內(nèi)可以抑制抵抗素的表達(dá),其表達(dá)量下降了4.3％,高劑量地塞米松均能誘導(dǎo)抵抗素的表達(dá)。
　　 3、盡管胰島素、葡萄糖、地塞米松都能不同程度地促進(jìn)抵抗素基因表達(dá),但均不能改變豬前脂肪細(xì)胞分化