鹽芥microRNA164基因功能研究.pdf

1、山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽芥microRNA164基因功能研究姓名：趙益超申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：張慧20090411山東師范大學(xué)碩士論文擬。靶基因模擬提供了一種新的分析m i R N A 功能的方法。鹽芥與擬南芥近緣，屬于十字花科植物。具有擬南芥很多同樣的優(yōu)點(diǎn)以作為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)：如類似的形態(tài)、小的基因組、短的生活史、豐富的種子和易于被轉(zhuǎn)化等。但是，鹽芥對(duì)多種脅迫的耐受能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于擬南芥。是一種新型的鹽生模式植物。本實(shí)驗(yàn)

2、以鹽芥為材料，設(shè)計(jì)兩對(duì)引物分別從擬南芥中克隆獲得M g R l 6 4 基因和m 鉗基因。一方面將M I R l 6 4 基因連接本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的p C A M B I A ．改造后的p C A M B I A 3 3 0 1 載體，構(gòu)建了M l R l 6 4 過量表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌浸染野生型鹽芥，獲得過量表達(dá)轉(zhuǎn)化株系。另一方面，將I P S l 錯(cuò)配環(huán)兩端與m i R 3 9 9 互補(bǔ)配對(duì)的片段替換成與m i R l 6 4 互補(bǔ)配

3、對(duì)的片段，連接p C A M B I A ．改造后的p C A M B I A 3 3 0 1 載體，構(gòu)建成M I R l 6 4 沉默載體，轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌浸染野生型鹽芥，獲得M I R l 6 4 沉默轉(zhuǎn)化株系3 株。同時(shí)，為了驗(yàn)證鹽芥中C U C 2 也是m i R l 6 4 的靶基因，進(jìn)行了鹽芥C U C 2 同源基因的克隆。首先，提取鹽芥R N A ，反轉(zhuǎn)錄獲得e D N A ，然后設(shè)計(jì)一對(duì)簡(jiǎn)并引物，以鹽芥e D N A為模板進(jìn)行