2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文目的在于研究模式植物鹽芥EST庫中某未知基因的生物學功能,因此將多種鑒定方法用于同一基因的功能的研究。通過多種方法,研究了鹽芥EST庫中某未知基因的功能,并推測該基因在鹽芥耐鹽機制中的作用。 在200mM的NaCl處理的45日齡小鹽芥(山東東營)地上部分構(gòu)建的λZap-cDNA文庫(EST文庫)中,篩選到的第100(B1698705)號序列是一個未知蛋白,我們命名為NOVEL蛋白。通過對其序列特征、基因結(jié)構(gòu)的分析得知該蛋白

2、基因全長序列為474bp,編碼158個氨基酸(158AA,大約18KD)。該未知蛋白在該EST庫中相比于對照表達豐度較高,并且在大約1580個標簽中該基因檢測到六個,均為表達豐度較高的基因。通過軟件分析描述該蛋白可能定位于核內(nèi)。該蛋白分子較小,推測該蛋白可能具有NaCL誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的特性,將重點研究其功能與作用。 Northern-Blotting分析表明小鹽芥在200mmol/LNaCl處理不同時間下的該基因在鹽芥地上

3、部分表達量明顯高于對照,隨時間的延長該基因在鹽芥地上部分中的表達量會增加,48hr達到最高;用不同濃度的NaCl處理鹽芥24小時,發(fā)現(xiàn)不同濃度NaCl處理后該基因在鹽芥地上部分的表達量也有所升高,其中在150mMNaCl處理下轉(zhuǎn)錄水平最高,而在200mMNaCl處理下轉(zhuǎn)錄水平又開始略微下降;該基因在4℃低溫處理下的表達量顯著提高,3小時其表達量達最高,隨著處理時間的延長Novel基因的表達量又逐漸降低;該基因在40℃高溫處理下表達量變化

4、趨勢不明顯。 該基因在鹽芥中的沉默株系中,在NaCL(200mmol/L)及長期(45天)冷(4℃)處理下并未見較明顯表現(xiàn)型;該基因在擬南芥中的過量表達株系,進行了多組處理。 野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥生長45天后,用200mMNaCl處理24小時,處理中轉(zhuǎn)基因擬南芥生長狀況均好于野生型;在氧化脅迫處理實驗中,0.5μM甲基紫精(MethylViologenMV)處理對于擬南芥野生型的傷害作用更大;2μMABA(脫落酸)處

5、理的生長形勢來看,對于野生型來說,發(fā)芽率以及生長情況都不及轉(zhuǎn)基因過量表達型,直觀看到該轉(zhuǎn)基因過量表達擬南芥的抗鹽性有所提高。 實驗又構(gòu)建了原核表達體系,在體外表達純化該基因編碼的蛋白,用于制備抗體。但由于抗體制備過程中抗原純化的困難,使得抗體特異性不高,無法進行進一步的免疫共沉淀實驗。 又進行了該基因編碼蛋白的細胞內(nèi)定位實驗,采用綠色熒光蛋白載體pPK100構(gòu)建了NOVEL-GFP融合蛋白表達載體,并在洋蔥表皮細胞內(nèi)

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