健脾益肺方治療ALS動物模型hSOD1-G93A轉基因小鼠的療效和機制研究.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經特別加以注明引用的內容外，本論文不含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名』趔日期：多口，f年皓月刁日關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學有關保留使用學位論文的規(guī)

2、定，同意學校保留或向國家有關部門機構送交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權廣州中醫(yī)藥大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復印手段保存和匯編本學位論文。(保密論文在解密后應遵守此規(guī)定)論文作者簽毫地淪文導師簽日期：砂k每月／。i虧’ni2生存期死亡時間：將鼠翻身為仰臥位30s內無法翻回俯臥位即Weydt為0分，登記為死亡。3運動功能(1)懸尾實驗：懸提鼠尾，觀測后肢的伸張及其曲

3、腰情況，并予評分。2分：正常；1分：部分正常；0分：缺失。(2)牽引實驗：將小鼠放于30公分長的鐵絲上，小鼠5分鐘內掉落的次數(小鼠掉落后，立刻將其放置鐵絲上繼續(xù)實驗)。(3)跑臺實驗：將小鼠放在疲勞轉棒儀上，以轉速16圈／分鐘連續(xù)5分鐘，登記每組小鼠的平均掉棒次數(小鼠掉棒后，立即將其放置回疲勞轉棒儀上繼續(xù)實驗)。(三)健脾益肺組方治療后的病理改變應用4％的多聚甲醛經心臟灌注，后固定24小時，蔗糖梯度脫水，用OCT包埋，取脊髓的腰段進

4、行冰凍切片(切片厚度20um)，每隔3片取1片。應用焦油紫進行尼氏染色。前角運動神經元的計數標準：具有清晰可辨的尼氏結構，清晰的細胞核和核仁，胞體較大的多角細胞。(四)健脾益肺組方治療機制的探討抗氧化自由基：硫代巴比妥酸法檢測MDA的含量；亞硝酸鹽法測定SOD的活性；二硫代二硝基苯甲酸法測定GSH的含量；二硝基苯甲酸法測定GSHPx的活性，按照試劑盒說明書操作。結果：1體重的變化8周齡模型小鼠開始進行體重測定，第812周各組間的體重無顯

5、著性差異，至第12周開始，生理鹽水組模型小鼠體重開始減輕，低濃度、中濃度、高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重仍緩慢增加；第13周開始，低濃度、中濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重也開始下降，而高濃度組模型小鼠體重仍在緩慢增加；約15周開始，高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重開始下降，同生理鹽水組模型小鼠比較，低濃度、中濃度、高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠體重下降趨勢較慢，且呈濃度正相關性。低濃度健脾益肺方治療組模型小鼠與生理鹽水組模型小鼠

6、比較，差異不具有統(tǒng)計學意義；中濃度、高濃度健脾益肺方治療組模型小鼠與生理鹽水組模型小鼠比較，差異具有顯著的統(tǒng)計學意義(PO01)。2對發(fā)病時間和生存期的影響生理鹽水組的模型小鼠在(1015345)天出現臨床癥狀，即Weydt4分法，評分4分時(為發(fā)病時間)，模型小鼠在病程中會出現后肢無力，懸尾時后肢震顫、后伸乏力的表現，至終末期時雙側后肢呈牽直樣強直、背部屈曲，終因飲食艱難、呼吸無力而死亡，平均存活時間為(1332232)天。低濃度、中