利用轉(zhuǎn)基因小鼠模型進(jìn)行轉(zhuǎn)基因動(dòng)物安全評(píng)價(jià)研究.pdf

1、近30年來，隨著轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)的迅猛發(fā)展，不僅給農(nóng)業(yè)和生物醫(yī)藥領(lǐng)域帶來了革命性的變化，同時(shí)也引起了一系列相關(guān)的問題，如轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及其產(chǎn)品的食用安全問題、倫理道德問題以及對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響等。這些問題迫使世界各國(guó)都在加強(qiáng)對(duì)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的管理工作，制定完善的有關(guān)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及其食品安全的管理法規(guī)及標(biāo)識(shí)制度。然而，這些法規(guī)制度的制定需要有健全的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物檢測(cè)體系來提供技術(shù)保障。本文主要從核酸水平對(duì)小鼠外源轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了研究。 1)

2、轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性鼠的檢測(cè)采用一步法抽提鼠尾基因組DNA,得到OD值在1.7-1.9之間的高質(zhì)量DNA，首先用普通PCR檢測(cè)得到陽(yáng)性鼠，然后通過Southern雜交進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示：4個(gè)轉(zhuǎn)基因后代中3個(gè)檢測(cè)為陽(yáng)性，一個(gè)沒有檢測(cè)到信號(hào)，但后面經(jīng)過熒光定量PCR和TAIL-PCR檢測(cè)證明，其也為轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性。 2)外源基因結(jié)構(gòu)檢測(cè)建立多重PCR技術(shù)，在同一管中同時(shí)擴(kuò)增一個(gè)內(nèi)源基因和3個(gè)外源基因片段(包括外源目的基因、啟動(dòng)子和終止子)，擴(kuò)增得

3、到特異性好的4重PCR結(jié)果。表明此技術(shù)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物檢測(cè)可以大大提高工作效率和速度。 3)整合位點(diǎn)檢測(cè)根據(jù)插入外源基因5'端序列設(shè)計(jì)特異性引物和小鼠基因密碼子的偏好性設(shè)計(jì)隨機(jī)引物，用TAIL-PCR檢測(cè)4個(gè)轉(zhuǎn)基因founder小鼠F1代陽(yáng)性小鼠的外源基因插入位點(diǎn)。得出2個(gè)轉(zhuǎn)基因小鼠的外源基因插入位點(diǎn)，分別插入在10號(hào)染色體的Sash1基因的第10內(nèi)含子上和6號(hào)染色體Nxph1和AA545190基因間。 4)拷貝數(shù)檢測(cè)選擇