膽固醇對(duì)早老性癡呆轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型APP加工及Aβ生成的影響.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性變性疾病，其主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶減退和認(rèn)知障礙。AD的神經(jīng)病理表現(xiàn)主要是海馬區(qū)和新皮質(zhì)區(qū)彌散性的神經(jīng)元丟失、神經(jīng)纖維纏結(jié)和細(xì)胞外的類淀粉樣沉積。Aβ是一組由β淀粉樣前體蛋白(β-amyloidprecursorprotein，APP)降解產(chǎn)生的含39-43個(gè)氨基酸殘基的混合物。類淀粉樣蛋白假說(shuō)認(rèn)為Aβ的生成過(guò)多和細(xì)胞外Aβ沉積是AD發(fā)病最原始、最

2、重要的病因。目前很多流行病學(xué)資料顯示高血脂可能和AD的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。高脂高膽固醇飲食已成為一個(gè)公認(rèn)的AD危險(xiǎn)因子，而且眾多流行病學(xué)調(diào)查以及體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)均證明膽固醇水平對(duì)于APP代謝，Aβ產(chǎn)生具有重要調(diào)節(jié)意義。有人認(rèn)為他汀類藥物作為一種目前應(yīng)用最廣的降脂藥可以通過(guò)減少細(xì)胞的膽固醇水平減少Aβ的生成，但也有人認(rèn)為他汀類藥物對(duì)AD的保護(hù)作用與其降低膽固醇的作用并不直接相關(guān)。 為了在體研究膽固醇對(duì)APP代謝及Aβ的生成中的作用以及他汀

3、類藥物是否具有AD保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)建立了不同血膽固醇濃度梯度的APP轉(zhuǎn)基因小鼠模型。36只APP轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性鼠被平均分為4組：①高脂飼料給藥組②正常飼料給藥組③高脂飼料安慰劑組④正常飼料安慰劑組；另有9只同窩陰性鼠設(shè)為⑤陰性對(duì)照組。分別給予高脂高膽固醇飼料或正常飼料喂養(yǎng)6個(gè)月后給予辛伐他汀或安慰劑灌胃28天，使各組動(dòng)物出現(xiàn)不同血膽固醇梯度。WesternBlot檢測(cè)APP、C99、BACE、PS-1和Aβ42表達(dá)水平，免疫組織化學(xué)檢測(cè)Aβ

4、42表達(dá)差異，Bielschowsky改良法觀察早期老年斑，NADPH-d酶組織化學(xué)染色檢測(cè)腦組織NOS表達(dá)差異。 WesternBlot結(jié)果顯示：各組動(dòng)物的APP表達(dá)量無(wú)明顯差異，說(shuō)明膽固醇不會(huì)影響APP的表達(dá)水平。正常飼料給藥組和高脂飼料安慰劑組的PS-1表達(dá)增高，海馬CA2區(qū)Aβ42陽(yáng)性細(xì)胞較正常飼料安慰劑組明顯升高，在這兩組動(dòng)物中觀察到早期老年斑，且這兩組動(dòng)物海馬區(qū)NOS表達(dá)較其他組明顯減少。其機(jī)制可能是異常的(過(guò)高或過(guò)

5、低)的血膽固醇水平可以促進(jìn)γ分泌酶，而不是β分泌酶對(duì)APP的切割從而增加Aβ的生成，促成海馬區(qū)的神經(jīng)病理?yè)p害。高脂血癥可能是AD的危險(xiǎn)因素，過(guò)高的膽固醇水平增加γ分泌酶對(duì)APP的異常切割從而增加Aβ的生成。對(duì)血膽固醇水平偏高的動(dòng)物進(jìn)行他汀類藥物灌胃可以有效地降低其膽固醇水平，其機(jī)制可能是由于γ分泌酶和C99均定位在脂筏上，他汀類藥物通過(guò)解離γ分泌酶與脂筏的結(jié)合從而減少對(duì)APP的切割最終減少Aβ的生成。但是，對(duì)血膽固醇水平正常的動(dòng)物進(jìn)行他