還腦益聰方對(duì)APP-PS1雙轉(zhuǎn)基因癡呆模型小鼠PS1及NCT基因調(diào)控通路的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦組織海馬早老蛋白相關(guān)基因表達(dá)的變化，探討還腦益聰方干預(yù)癡呆模型小鼠的藥理作用及其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 選取3月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因癡呆模型小鼠50只隨機(jī)分為模型組、西藥組、還腦益聰方（HNYCF，由制首烏、人參、川芎、黃連、石菖蒲組成）低劑量組、中劑量組及高劑量組，每組10只，另取3月齡相同遺傳背景的C57BL/6J小鼠10只

2、作為正常對(duì)照組，各組灌胃給藥，每日一次，連續(xù)灌胃3個(gè)月，正常組和模型組灌胃等體積蒸餾水，西藥組灌胃鹽酸多奈哌齊(0.65mg/kg)水溶液，中藥各劑量組分別按照5.46g生藥/kg、10.92g生藥/kg、21.84g生藥/kg灌胃給藥，給藥結(jié)束后進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察不同組別學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能的變化，HE染色觀察腦組織海馬CA1區(qū)病理形態(tài)的變化，免疫組織化學(xué)法觀察小鼠海馬組織中磷酸化APP和Aβ1-42的含量。RT-PCR法檢測(cè)小鼠海馬組

3、織中PS1、CHIP、CDC42、NCT、AP-1、NFAT等相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常組比較，模型組小鼠潛伏期顯著延長(zhǎng)(P＜0.01)，游泳路程顯著增長(zhǎng)(P＜0.01)，穿臺(tái)次數(shù)及第四象限游泳路程均顯著減少(P＜0.01)。服用HNYCF后，與模型組比較，各給藥組小鼠的潛伏期顯著縮短（P＜0.05或P＜0.01），游泳路程顯著縮短（P＜0.05或P＜0.01）;各給藥組穿臺(tái)

4、次數(shù)顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），HNYCF低、中、高劑量組第四象限路程均顯著增加(P＜0.05)。
　　 小鼠腦組織病理形態(tài)顯示，正常組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元染色均一，細(xì)胞密集、排列整齊，細(xì)胞膜清晰，核仁比較明顯;模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，細(xì)胞稀疏、排列紊亂，部分細(xì)胞胞體縮小，胞膜核膜界限不清晰，部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，甚至壞死;經(jīng)藥物治療3個(gè)月后，與模型組相比，各用藥組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量較多，細(xì)胞排列

5、較為致密整齊，偶見(jiàn)空泡變性、細(xì)胞核固縮，少有細(xì)胞壞死，以HNYCF中劑量組形態(tài)變化最為明顯。
　　 小鼠海馬CA1區(qū)磷酸化APP及Aβ1-42表達(dá)的免疫組化染色顯示，各組小鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞均有不同程度的棕黃色染色，與正常組比較，模型組小鼠磷酸化APP和Aβ1-42表達(dá)顯著增多(P＜0.01);用藥3月后，與模型組比較，HNYCF低、中、高劑量組小鼠海馬CA1區(qū)磷酸化APP和Aβ1-42表達(dá)均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜

6、0.05)。
　　 RT-PCR結(jié)果顯示:與正常組比較，模型組及各用藥組小鼠的PS1 mRNA及CHIP mRNA表達(dá)均顯著升高（P＜0.01或P＜0.05）;用藥3月后，與模型組比較，HNYCF低劑量組、中劑量組及高劑量組PS1 mRNA和CHIP mRNA表達(dá)均顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），且HNYCF中劑量組降低最為明顯;各組CDC42 mRNA表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。與正常組比較，模型組及各用藥組小鼠

7、的NCT mRNA、AP-1 mRNA及NFAT3 mRNA表達(dá)均無(wú)顯著性差異(P＞0.05);用藥3月后，與模型組比較，各用藥組小鼠的NCT mRNA、AP-1 mRNA及NFAT3 mRNA表達(dá)均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)
　　 結(jié)論:
　　 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因癡呆模型小鼠6月齡時(shí)已經(jīng)表現(xiàn)出明顯的記憶和認(rèn)知功能障礙，腦組織內(nèi)有神經(jīng)元的損傷和病理形態(tài)改變，熱休克蛋白70羧基端作用蛋白(CHIP)基因表達(dá)異常。