HDAC2對APP-PS1轉基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用及機制研究.pdf

1、博士學位論文學校代碼：10023學號：B2010007004HDAC2對APP／PSl轉基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用及機制研究所院：北京協(xié)和醫(yī)學院實驗動物研究所姓名：劉羽指導教師：秦川教授導師小組：秦川教授張連峰教授魏強教授學科專業(yè)：病理學與病理生理學研究方向：阿爾茨海默病的發(fā)病機制研究完成日期：二零一三年四月中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院博士學位論文第一部分HDAC2對APP／PSl轉基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用及機制研究摘要背景阿

2、爾茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是以進行性癡呆為主要表現的神經退行性疾病。主要病理學表現為，大腦內老年斑形成、神經元神經纖維纏結、神經元和突觸丟失。到目前為止對AD發(fā)病的機制研究還不十分清楚。最近研究顯示，除了APP、PS和ApoE基因突變參與AD發(fā)病過程外，各種各樣的環(huán)境因素成為導致AD發(fā)病的致病岡素之一。表觀調節(jié)機制尤其是組蛋白修飾參與AD發(fā)病過程中突觸丟失、學習記憶力損傷。組蛋白乙?；揎検怯山M蛋白乙?；?/p>

3、(HATs)和組蛋白去乙酰酶(HDACs)動態(tài)調節(jié)的結果。HDAC2在神經系統(tǒng)的發(fā)育及生理過程中起著重要作用，HDAC2主要分布于與學習記憶力形成相關的海馬CAl、CA3、DG區(qū)域，通過調節(jié)突觸可塑性相關蛋白和改變神經元回路對學習和記憶力起到負性調節(jié)作用。AD患者與同齡人群相比腦組織CAl區(qū)域和內嗅皮層的神經元中HDAC2表達量增加，本課題為了探討AD模型小鼠腦部特異性敲除HDAC2后是否對AD的病理過程產生影響。方法腦組織特異性敲除H

4、DAC2的模犁小鼠與APP／PSl雙轉基因小鼠雜交，獲得APP／PSl腦部特異性敲除HDAC2模型小鼠。檢測4月齡WT、AD、HDAC2K0和ADHDAC2KO模型小鼠身長、腦重、體重、腦重比體重系數等指標。免疫組織化學、免疫熒光化學和免疫印跡等方法檢鋇JJHDAC2在wT、AD、HDAC2KO、AD—HDAC2KO模型小鼠腦組織表達情況。應用開放曠場、新物體識別實驗不HMorris水迷寓實驗檢；!)!llWT、AD、HDAC2KO及A

5、DHDAC2KO模型小鼠自主活動的改變和小鼠學習記憶能力的改善情況。免疫組織化學和硫磺素S染色檢測腦內老年斑含量；應用ELISA方法檢測小鼠腦內可溶性A[340不IA[342總量；Westernblotting檢Nd鼠腦內APP降解相關蛋白BACEl、PSl、ADAMl0、ADAMl7、sAPPer、sAPPl3、[3CTF及0【CTF的表達量；榆測突觸可塑性相關蛋白PSD95和突觸素(Syn)的表達量；檢測腦部信號通路分子PAKT、P

6、GSK3[3及P—CREB的變化。結果4月齡的腦部特異性敲除HDAC2的APP／PSi雙轉基岡小鼠，與WTd鼠相比其體長矮小、體重較輕，而腦重及腦重比體重系數沒有差別。免疫組化及免疫熒光結果顯示，APP／PSl雙轉基因小鼠腦部特異性敲除HDAC2后其腦組織中皮層和海馬CAl、齒狀吲DG區(qū)域神經元內HDAC2被敲除；同時結合免疫印跡實驗結果顯示可有效敲除腦部HDAC2。建立腦部特異性敲除HDAC2的APP／PSl模型小鼠，6月齡模型小鼠在