Aβ3-10短肽疫苗早期主動(dòng)免疫APP-PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)抗體形成及對(duì)腦內(nèi)Aβ沉積的研究.pdf

1、目的：
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是臨床上最常見(jiàn)的引起癡呆的疾病，近期記憶損害為其主要的臨床表現(xiàn)。AD主要的病理特征是細(xì)胞外β淀粉樣斑塊（β-amyloid plaques，Aβ斑）沉積和細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)。傳統(tǒng)的Aβ瀑布學(xué)說(shuō)認(rèn)為Aβ斑的毒性作用位于發(fā)病機(jī)制的核心，Aβ斑的存在誘導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)微管相關(guān)tau蛋白的過(guò)度磷酸化、神經(jīng)元纖維纏結(jié)、突觸損害，最終導(dǎo)致AD的發(fā)生。
　　對(duì)Solane

2、zumab的Ⅲ期臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次分析顯示，輕度認(rèn)知障礙的患者(AD前輕度認(rèn)知功能障礙)從Solanezumab的被動(dòng)免疫治療中獲益，表現(xiàn)為認(rèn)知功能障礙下降的延緩，提示預(yù)防性免疫的重要性。本實(shí)驗(yàn)選用幼年APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠，在小鼠腦內(nèi)還沒(méi)有Aβ沉積的情況下，使用我們構(gòu)建的新型針對(duì)Aβ3-10位點(diǎn)的多肽疫苗對(duì)小鼠進(jìn)行預(yù)防性免疫，比較我們構(gòu)建的新型疫苗與傳統(tǒng)的Aβ1-42肽疫苗刺激體內(nèi)抗體形成的水平，并探討主動(dòng)免疫對(duì)Aβ沉積的影響。

3、
　　方法：
　　人工合成連接血藍(lán)蛋白(Keyhole limpet hemocyanin，KLH)的Aβ3-10肽段作為實(shí)驗(yàn)組的免疫肽段，以Aβ1-42肽作為對(duì)照組1的免疫肽段，以PBS作為對(duì)照組2。將Aβ3-10-KLH、Aβ1-42分別配成濃度為2mg/ml的溶液，將其分別與弗氏佐劑（第一次注射為弗氏完全佐劑，以后每次注射為弗氏不完全佐劑）等體積混合，配成濃度為1 mg/ml的溶液，取100ul（即100ug/100u

4、l／只）小鼠皮下注射。前兩次免疫的時(shí)間間隔為2周，以后每次免疫的時(shí)間間隔為4周。在免疫前及每次免疫后10天采血提取血清。利用PH=3.5的酸性條件使Aβ和抗體解離后，根據(jù)Aβ和抗體的分子量不同，使用超濾離心管將Aβ和抗體分離，再使用傳統(tǒng)的ELISA方法檢測(cè)免疫前及每次免疫后血清中總抗體濃度。使用免疫組化的方法檢測(cè)小鼠腦內(nèi)Aβ斑的沉積情況。
　　結(jié)果：
　　使用我們合成的新型多肽疫苗Aβ3-10-KLH和傳統(tǒng)的全長(zhǎng)Aβ1-42

5、疫苗免疫APP/PS1小鼠均可成功刺激小鼠產(chǎn)生抗Aβ抗體，且抗體的水平隨免疫次數(shù)的增加而逐漸增高。將KLH與Aβ3-10耦聯(lián)后，可增強(qiáng)Aβ3-10短肽的免疫原性，刺激小鼠在早期產(chǎn)生高水平的抗體，至末次免疫后，Aβ3-10-KLH刺激小鼠產(chǎn)生的抗體平均水平比傳統(tǒng)的全長(zhǎng)Aβ1-42肽高，但兩者之間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。小鼠腦片免疫組化染色顯示，與PBS組相比，Aβ3-10-KLH組、Aβ1-42組腦內(nèi)Aβ斑的沉積量明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意