亞甲藍(lán)對(duì)APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種多病因的疾病，許多學(xué)者認(rèn)為AD是一種慢性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)。其中星形膠質(zhì)細(xì)胞（Astrocyte，AC）通過與炎癥介質(zhì)相關(guān)的多向性方式而被激活，其分泌的腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor，TNF-α)、白介素6(Interleukin6，IL-6)、載脂蛋白E(Apolipoprotein E， ApoE)以及s-100

2、β蛋白等胞外酶，對(duì)老年斑(Senile plaque， SP)和神經(jīng)原纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles， NFTs)的形成發(fā)揮重大的作用。因此，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的過度激活，減少TNF-α等前炎癥因子過度釋放可以有效的阻止腦組織的破壞，維護(hù)腦的正常功能。
　　 Rember是一種新開發(fā)的治療AD的藥物，其主要成分是亞甲藍(lán)(Methylene Blue，MB)，在二期臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的療效。有研究證實(shí)亞甲

3、藍(lán)能抑制高鐵血紅蛋白的生成，具有還原作用，從而抑制過度炎性反應(yīng)。因此，本研究擬通過給予APP/PS1小鼠口服適量亞甲藍(lán)，觀察亞甲藍(lán)對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶及膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP）、TNF-α在海馬結(jié)構(gòu)的表達(dá)變化，同時(shí)對(duì)比觀察亞甲藍(lán)對(duì)其表達(dá)改變的影響，為阿爾茨海默病的預(yù)防和治療提供可信的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：

4、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供的20只3月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠，隨機(jī)分2組，每組10只，雌雄不限。(1)對(duì)照組：自由飲水。(2)治療組：根據(jù)小鼠飲水量將亞甲藍(lán)加入日常飲水中，用量約25mg·kg-1·d-1，連用4個(gè)月。
　　 2、采用Morris水迷宮行為學(xué)測(cè)試各組小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力，記錄其每個(gè)時(shí)間段的平均逃避潛伏期。
　　 3、用免疫組織化學(xué)染色法觀察各組小鼠海馬結(jié)構(gòu)GFAP的分布和表達(dá)情況。
　　 4

5、、用免疫印記( Western blotting)方法檢測(cè)各組小鼠海馬結(jié)構(gòu)GFAP和TNF-α的表達(dá)水平。
　　 5、采用TUNEL染色方法觀察各組小鼠海馬結(jié)構(gòu)神經(jīng)元的凋亡情況。
　　 6、結(jié)合圖像采集分析系統(tǒng)，上述所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s）表示，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，用單因素方差分析進(jìn)行組間比較，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1

6、、Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果表明亞甲藍(lán)治療組較對(duì)照組各時(shí)間段的平均逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.05），所經(jīng)過的路程明顯縮短（P＜0.05），跨過平臺(tái)相應(yīng)位置的次數(shù)明顯增多（P＜0.05）。
　　 2、免疫組織化學(xué)染色觀察到亞甲藍(lán)治療組海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG的GFAP表達(dá)較對(duì)照組明顯下調(diào)(P＜0.05）。
　　 3、Western blotting方法顯示亞甲藍(lán)治療組小鼠海馬結(jié)構(gòu)的GFAP和TNF-α的表達(dá)量與對(duì)

7、照組相比呈降低趨勢(shì)(P＜0.05）。
　　 4、TUNEL染色法發(fā)現(xiàn)亞甲藍(lán)治療組海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯減少(P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、亞甲藍(lán)可以改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 2、亞甲藍(lán)能夠下調(diào)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG的GFAP的表達(dá)。
　　 3、亞甲藍(lán)能夠下調(diào)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬結(jié)