亞甲藍對APP-PS1小鼠海馬結構Aβ及其相關蛋白表達的影響.pdf

1、目的：
　　 阿爾茨海默病(Alzhermer disease,AD)是引起老年癡呆的最常見因為,在AD患者及APP/PS1轉基因小鼠中均觀察到海馬結構的UCH-L1含量及樹突棘密度的明顯降低。Rember是一種新開發(fā)的治療阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)的藥物,其主要成分是亞甲藍,在二期臨床試驗中表現(xiàn)出良好的療效。亞甲藍低濃度下可以使神經(jīng)元纖維纏結(Neurofibrillary tangles,NFT

2、s)溶解,極低濃度下能夠增強線粒體復合體Ⅵ功能從而延緩人胚肺成纖維細胞(IMR90)衰老。目前關于亞甲藍對阿爾茨海默病模型鼠的研究很少,而亞甲藍對APP/PS1小鼠UCH-L1及樹突棘密度的影響尚未見文獻報道。
　　 因此,本研究擬通過給予APP/PS1小鼠口服適量亞甲藍,采用跳臺回避實驗、Western blotting、免疫熒光、高爾基染色等方法觀察亞甲藍對APP/PS1轉基因小鼠學習記憶及UCH-L1表達改變及對樹突棘密度

3、變化的的影響。本研究結果將為老年性癡呆的預防和治療以及亞甲藍的臨床應用提供可靠的實驗依據(jù)。
　　 材料與方法
　　 1、實驗動物及分組:中國醫(yī)科大學實驗動物部提供的20只3月齡APP/PS1轉基因小鼠,以及10只同齡相同品系C57bL/6小鼠(野生型),將動物分為3組,每組10只,雌雄不限。(1)模型組:轉基因小鼠,自由飲水。(2)給藥組:根據(jù)小鼠飲水量將亞甲藍加入日常飲水中,用量約25 mg·kg-1·d-1,連用4個

4、月。(3)對照組:C57bL/6野生小鼠,不施加任何處理因素。
　　 2、跳臺回避實驗:測試各組小鼠的學習記憶能力,記錄每組小鼠的錯誤次數(shù)和潛伏期。
　　 3、噻嗪紅染色:形態(tài)學鑒定APP/PS1小鼠及觀察APP/PS1小鼠海馬結構老年斑分布。
　　 4、Elisa方法:檢測各組小鼠海馬結構Aβ1-40、Aβ1-42的含量。
　　 5、Aβ快速染色:觀察3組小鼠海馬結構Aβ的表達。
　　 6、免疫

5、熒及Western blotting方法:觀察各組小鼠海馬結構UCH-L1的分布和表達情況。
　　 7、高爾基染色:觀察各組小鼠海馬CA1區(qū)樹突棘密度的變化。
　　 8、統(tǒng)計學分析:結合圖像采集分析系統(tǒng),所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((x)±5)表示,應用SPSS11.0統(tǒng)計軟件,用單因素方差分析進行組間比較,P<0.05為有統(tǒng)計學意義,P<0.01為有顯著統(tǒng)計學意義。
　　 實驗結果
　　 1、跳臺回避實驗結

6、果表明模型組小鼠各時間段的平均潛伏期較對照組明顯延長,錯誤次數(shù)增多(P<0.05),而給藥組較模型組各時間段的平均潛伏期明顯縮短,錯誤次數(shù)減少(P<0.05)。
　　 2、7月齡APP/PS1小鼠海馬結構觀察到老年斑,而正常小鼠未觀察到。
　　 3、Elisa檢測結果顯示治療組與模型組Aβ1-40、Aβ1-42無明顯差別(P>0.05),在正常小鼠中未檢測到Aβ1-40、Aβ1-42。
　　 4、免疫熒光及免疫印

7、記結果證明了模型組小鼠海馬結構UCH-L1的表達量較正常對照組明顯降低(P<0.01)。而治療組較模型組含量明顯增加(P<0.01)。
　　 5、高爾基銀染結果證實了給藥組小鼠海馬CA1區(qū)的第2級樹突的樹突棘平均密度較模型組增加28.79％,兩組存在明顯差異(P<0.01)。而給藥組與正常對照組之間無明顯統(tǒng)計學差異。
　　 結論
　　 1、跳臺回避實驗結果表明MB可改善APP/PS1小鼠的學習記憶能力。