人胰島素原乳腺特異表達(dá)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠模型的制備.pdf

1、利用非胰島β細(xì)胞生產(chǎn)胰島素一直生物合成胰島素研究領(lǐng)域的熱點，胰島素原在胰島β細(xì)胞中主要通過PC1/3，PC2和CPH三種酶加工成有活性的胰島素。研究發(fā)現(xiàn)，PC1/3酶在哺乳動物乳腺細(xì)胞中廣泛表達(dá)。
　　本研究合成了兩條經(jīng)過修飾得人胰島素原基因，Seq-662、Seq-792，以及未經(jīng)過修飾的胰島素原基因，Seq-663。構(gòu)建乳腺特異表達(dá)載體662-PBC-1、663-PBC-1、792-PBC-1。利用人乳腺癌細(xì)胞系，BCAP-3

2、7制備轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，分離單細(xì)胞來源細(xì)胞65株，其中攜帶外源基因的細(xì)胞23株。選取其中的662-B4、663-4和792-F三株進(jìn)行誘導(dǎo)、刺激人胰島素原基因的表達(dá)顯示，在相同誘導(dǎo)時間內(nèi)，不同轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中人胰島素原基因的表達(dá)，隨著葡萄糖刺激濃度的不斷增加，但是不同細(xì)胞對于葡萄糖的反應(yīng)存在不同。綜上所述，本研究構(gòu)建了2個修飾的人胰島素原乳腺表達(dá)載體，并且檢測發(fā)現(xiàn)，他們能夠在細(xì)胞和個體水平很好的誘導(dǎo)表達(dá)人胰島素原基因。這將為今后在大動物乳腺中生產(chǎn)