肝細(xì)胞特異表達(dá)嵌合性CreERt重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠建立.pdf

1、以小鼠體細(xì)胞突變的時(shí)空控制將易于基因功能的研究和人類疾病動(dòng)物模型的建立.為了能在肝臟獲得以時(shí)空方式發(fā)生的、預(yù)定的遺傳修飾,一個(gè)可選擇途徑就是建立肝細(xì)胞特異表達(dá)依賴配體誘導(dǎo)的Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠.為此,該研究利用DNA重組,PCR,RT-PCR,Southern blot,組化染色和顯微操作等分子生物學(xué)技術(shù),來構(gòu)建肝細(xì)胞特異表達(dá)嵌合體,Cre-ERt重組酶的載體,制備肝細(xì)胞特異表達(dá)嵌合體Cre重組酶的轉(zhuǎn)基因小鼠及為檢測(cè)Cre重組酶活性的

2、報(bào)告小鼠.我們已成功構(gòu)建了肝細(xì)胞特異表達(dá)嵌合體Cre-ERt重組酶的構(gòu)件;在ZAP報(bào)告細(xì)胞中證實(shí)了Tamoxifen可誘導(dǎo)Cre介導(dǎo)重組,從而激活穩(wěn)定整合的hAP基因;攜帶有雙報(bào)告基因的ZAP細(xì)胞株為檢測(cè)Cre介導(dǎo)重組活性提供了可靠便利的檢測(cè)體系.我們又分別獲得了2個(gè)在肝細(xì)胞特異表達(dá)Cre-ERt轉(zhuǎn)基因小鼠3個(gè)為檢測(cè)Cre重組模式的ZAP報(bào)告小鼠品系.目前,為了檢測(cè)我們所建的2個(gè)表達(dá)Cre-ERt轉(zhuǎn)基因小鼠品系的重組特征,這些小鼠正與R