Ⅱ型肺上皮細(xì)胞表達(dá)Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠的建立.pdf

1、Ⅱ型肺上皮細(xì)胞能夠合成和分泌肺表面活性物質(zhì)(pulmonarysurfactant，PS)，調(diào)控肺的功能并與肺損傷后的修復(fù)有關(guān)。很多肺相關(guān)疾病的發(fā)生伴隨有Ⅱ型肺上皮細(xì)胞功能不全及PS系統(tǒng)缺陷。然而Ⅱ型肺上皮細(xì)胞在肺的發(fā)育、機(jī)體免疫及疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體功能尚不明確，對(duì)調(diào)控Ⅱ型肺上皮細(xì)胞功能的遺傳機(jī)制也知之甚少。 為了利用Cre-LoxP系統(tǒng)研究調(diào)節(jié)Ⅱ型肺上皮細(xì)胞功能的遺傳機(jī)制，本文研制了表面活性蛋白(SP-A)啟動(dòng)子指導(dǎo)C

2、re重組酶基因在轉(zhuǎn)基因小鼠Ⅱ型肺上皮細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠。構(gòu)建了含有表面活性蛋白A(SP-A)啟動(dòng)子、Cre重組酶基因和人生長(zhǎng)激素基因polyA的轉(zhuǎn)基因載體pSP-A-Cre。通過(guò)顯微注射將線性化的轉(zhuǎn)基因載體引入小鼠808枚受精卵中，其中729枚移植入36只假孕母鼠的輸卵管中使其發(fā)育，共獲得子代小鼠133只。經(jīng)PCR和Southern檢測(cè)鑒定出11只在基因組上整合有Cre重組酶基因的小鼠。將整合有Cre重組酶基因的首建者小鼠與Smad

3、4條件基因打靶小鼠及ROSA26報(bào)告小鼠交配，利用基因組PCR和LacZ染色檢測(cè)Cre重組酶表達(dá)的組織分布及其體內(nèi)介導(dǎo)LoxP位點(diǎn)間重組的活性。結(jié)果顯示,獲得了2個(gè)具有不同組織表達(dá)譜的Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠。SP-A-Cre1轉(zhuǎn)基因小鼠的肺、腦和消化道組織中表達(dá)Cre重組酶，Cre表達(dá)的組織分布與前人報(bào)道的SP-A組織分布一致。SP-A-Cre2轉(zhuǎn)基因小鼠僅在肺組織中特異性表達(dá)Cre重組酶。將SP-A-Cre1轉(zhuǎn)基因小鼠與Smad4條件