Cre-loxp重組系統(tǒng)介導轉基因絨山羊標記基因刪除的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、細胞核移植技術和轉基因技術的發(fā)展為動物新品種的培育提供了新的技術平臺。然而利用上述技術在轉入目的基因的過程中，為了便于篩選，同時也轉入了標記基因，抗生素抗性基因和熒光標記基因是常用的標記基因。標記基因的應用引起了人們對其安全性方面的關注和擔憂。而本研究的目的在于應用Cre/loxp重組系統(tǒng)，實現(xiàn)標記基因的安全刪除。
　　本研究首先給帶有K14啟動子的VEGF164基因兩端帶上兩個相同方向的loxp位點，之后與pDsReD2-1載體

2、連接，成功構建了表達載體pDsReD2-1-K14-VEGF-LOXP。之后用表達載體轉染絨山羊胎兒成纖維細胞，篩選出純度較高的轉基因細胞克隆。獲得的細胞克隆一部分用于生產(chǎn)轉基因克隆絨山羊胚胎，經(jīng)胚胎移植后獲得了轉基因的絨山羊，今后可以利用該轉基因絨山羊的體細胞進行標記基因的刪除研究。另一部分用帶有信號肽片段的重組Cre酶即HTNC酶處理，用以檢測不同的處理時間對轉基因細胞標記基因刪除效果的影響。收集不同處理時間的轉基因細胞，并通過實時

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