mGFP4和Cre-loxP系統(tǒng)在轉(zhuǎn)基因水稻中的應(yīng)用.pdf

1、隨著植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展,建立實(shí)用有效的無(wú)選擇標(biāo)記遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),培育不帶選擇標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因作物已成為國(guó)際上植物基因工程的一個(gè)發(fā)展方向.為優(yōu)化該實(shí)驗(yàn)室建立的雙T-DNA共轉(zhuǎn)化系統(tǒng)去除選擇標(biāo)記基因的技術(shù)體系和建立新的水稻去除標(biāo)記基因體系,該文研究了GFP和GFP-Hyg融合蛋白在水稻中的表達(dá),初步探討了Cre/loxP系統(tǒng)在轉(zhuǎn)基因水稻中的刪除效率.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得了4種攜帶mgfp4基因表達(dá)載體的水稻再生植株522個(gè)克隆,通過(guò)PCR、

2、Southern blot及后代遺傳分析,證明大部分外源基因以較低拷貝數(shù)整合進(jìn)水稻基因組中;通過(guò)熒光觀察及RT-PCR檢測(cè),表明了mGFP4在水稻中能表達(dá),但其發(fā)出的綠色熒光檢測(cè)效果不甚理想;通過(guò)PCR分析,推測(cè)在低溫誘導(dǎo)啟動(dòng)子(wcs)控制下,Cre基因可表達(dá)并實(shí)現(xiàn)外源基因的刪除.此外,該研究還建立了一種用NaOH處理法快速穩(wěn)定制備PCR模板的方法,該方法與常規(guī)CTAB法相比具有明顯的優(yōu)越性,對(duì)轉(zhuǎn)基因植物的大規(guī)模篩選與鑒定具有實(shí)際意義